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猕猴桃籽粕粗蛋白的加工性能及其纤维素合成酶类似蛋白的纯化、鉴定

作　者: 胡苗苗
导　师: 徐抗震
学　校: 西北大学
专　业: 化学工程
关键词: 猕猴桃籽粕 水溶性蛋白质 性能研究 分离纯化 结构鉴定
分类号: TS255.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 7次
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内容摘要


猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)是猕猴桃属藤本植物,果实酸甜可口,营养丰富,倍受人们喜爱。近年来,猕猴桃加工产品的市场越来越大,加工过程中产生的副产物-猕猴桃籽逐渐增多,因此,合理利用猕猴桃籽显得颇为重要。目前,国内外学者的研究主要集中在猕猴桃籽油方面,对猕猴桃籽粕蛋白质的研究较少。本文以猕猴桃籽粕为原料,开展猕猴桃籽粕粗蛋白的提取、加工性能研究、分离纯化以及纯化蛋白结构的初步鉴定,结果如下：①采用凯氏定氮法测定猕猴桃籽粕中总蛋白质的含量为16.26%,接下来使用不同溶剂逐级提取四种猕猴桃籽粕蛋白质,其中碱溶性蛋白质含量最高,约占猕猴桃籽粕干重的5.03%,水溶性蛋白质占5.00%,盐溶性蛋白质和醇溶性蛋白质含量较少。②采用碱溶酸沉法提取猕猴桃籽粕水溶性蛋白质,氨基酸分析显示,猕猴桃籽粕水溶性蛋白质氨基酸种类丰富,谷氨酸含量达到23.5mg/g,人体所需的八种必需氨基酸齐全；通过SDS-PAGE分析得出,猕猴桃籽粕水溶性蛋白质分子量较小,主要分布在20KDa～66KDa;猕猴桃籽粕水溶性蛋白质功能性质研究结果表明,pH7.5时,其乳化性和乳化稳定性较高,分别为35.33%、64.79%,起泡性能在pH4.0时较高,为34.83%。③采用荧光光谱法研究温度、溶液pH、变性剂对猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的构像和结构的影响,结果发现在pH7.0、25℃条件下,猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的最大发射波长为344nm,随着温度的升高(25℃-90℃),蛋白质荧光强度逐渐降低；不同pH对蛋白质荧光的影响表明,pH7.0时蛋白质的荧光强度最大；在十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、尿素、盐酸胍、丙烯酰胺这五种变性剂中,SDS对蛋白质的结构影响最明显,可使蛋白质中色氨酸残基的发射波长蓝移10nm。④采用硫酸铵沉淀法逐级盐析猕猴桃籽粕蛋白质,运用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sepharose CL-6B凝胶过滤层析柱对40%-80%硫酸铵饱和度下盐析的粗蛋白进行分离纯化,得到一种纯蛋白,SDS-PAGE显示蛋白可能由两个亚基组成(-53KDa和～65KDa),同时对纯化蛋白进行质谱分析,通过Mascot数据库分析推断出该蛋白质可能为纤维素合成酶类似蛋白。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章 绪论  8-14
  1.1 猕猴桃资源的概况  8-9
    1.1.1 猕猴桃简介  8
    1.1.2 猕猴桃资源分布  8-9
  1.2 猕猴桃资源的国内外研究现状  9-10
  1.3 猕猴桃籽的主要成分及研究现状  10-12
    1.3.1 猕猴桃籽的主要成分  10-11
    1.3.2 猕猴桃籽油的研究  11-12
    1.3.3 猕猴桃籽粕蛋白质的研究  12
  1.4 本文研究的主要内容  12-13
    1.4.1 猕猴桃籽粕蛋白质的提取及性质研究  12
    1.4.2 猕猴桃籽粕蛋白质的分离纯化  12-13
  1.5 选题依据及研究意义  13-14
第二章 猕猴桃籽粕蛋白质的提取及性质研究  14-33
  2.1 引言  14-15
  2.2 实验材料与方法  15-21
    2.2.1 材料与试剂  15
    2.2.2 仪器与设备  15-16
    2.2.3 实验方法  16-21
  2.3 结果与讨论  21-31
    2.3.1 猕猴桃籽的成分分析  21
    2.3.2 四种猕猴桃籽粕蛋白质的提取及含量测定  21-22
    2.3.3 最优条件下猕猴桃籽粕水溶性蛋白质提取率的计算  22
    2.3.4 猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的氨基酸分析  22-23
    2.3.5 猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的SDS-PAGE分析  23-24
    2.3.6 猕猴桃籽粕水溶性蛋白质功能性质的测定结果  24-25
    2.3.7 猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的荧光光谱分析结果  25-31
  2.4 本章小结  31-33
第三章 猕猴桃籽粕水溶性蛋白质的纯化及初步鉴定  33-48
  3.1 前言  33-34
  3.2 实验材料与方法  34-37
    3.2.1 材料与试剂  34
    3.2.2 仪器与设备  34
    3.2.3 实验方法  34-37
  3.3 结果与讨论  37-47
    3.3.1 猕猴桃籽粕蛋白质的硫酸沉淀结果  37
    3.3.2 考马斯亮蓝法测定各梯度水溶性蛋白质含量  37
    3.3.3 各梯度水溶性蛋白质的SDS-PAGE分析  37-38
    3.3.4 离子交换柱分离纯化40%～80%硫酸铵饱和度下水溶性蛋白质  38-39
    3.3.5 初级组分SDS-PAGE分析结果  39-40
    3.3.6 凝胶过滤层析柱分离纯化结果  40-41
    3.3.7 猕猴桃籽粕纯化蛋白质的SDS-PAGE分析  41-42
    3.3.8 纯化蛋白质的质谱分析  42-47
  3.4 本章小结  47-48
总结  48-50
参考文献  50-55
攻读硕士学位期间取得的科研成果  55-56
致谢  56

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 水果、蔬菜、坚果加工工业 > 水果加工食品
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