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类芽孢杆菌ZC01胞外多糖的制备及活性研究
作 者: 陈金苹
导 师: 张建法
学 校: 南京理工大学
专 业: 生物化工
关键词: 类芽孢杆菌ZC01 多糖 抗氧化 吸水 保湿 分离纯化
分类号: TQ929
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要
近些年来,微生物胞外多糖作为一种新的发酵产品,因为其具有独特的物理化学性质,易于获得,成本相对较低,而被广泛应用于各个行业。本实验室从河南省洛阳市郊区的一块红土农田的土样中分离培养出一株产胞外多糖的新菌株ZC01。该菌能够在无机盐培养基上生长,通过初步鉴定和16S rDNA同源性分析,确定该菌是一种类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.ZC01)。采用乙醇沉淀法,将ZC01菌的发酵液中的代谢产物沉淀析出并烘干,即可得到胞外多糖的粗品。通过单因素法优化发酵条件,得到产胞外多糖最高时的发酵条件为:可溶性淀粉30g/L,蛋白胨4g/L,磷酸氢二钠1.2g/L,磷酸二氢钾0.6g/L,氯化钙0.1g/L,氯化镁0.3g/L,硫酸亚铁0.0125g/L,硫酸锰0.003g/L,氯化锌0.01g/L,水1L,pH8.0,28℃。发酵液最高产量可达到15.5g/L。该菌所产的胞外多糖,各化学组分含量分别为水分8.65%、蛋白16.24%、灰分10.9%、总糖64.01%。通过分离纯化,气相色谱、红外光谱、核磁共振以及糖残基测定,确定该胞外多糖由四种单糖组成,是一种杂多糖。四种单糖成分分别为葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖,这四种单糖的摩尔比为1.2:1.2:0.7:1。并且发现多糖中含有一定量的糖醛酸,是一种酸性杂多糖。本实验还研究了多糖的吸水保湿效果和抗氧化性能,发现了该多糖具有与透明质酸相似的吸水保湿性能,具有良好的清除自由基的能力。因此,研究证明该多糖有广泛的应用前景,能大量应用于化妆品等行业。
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全文目录
摘要 5-6 Abstract 6-7 目录 7-10 1 绪论 10-20 1.1 多糖的研究 10-12 1.1.1 植物多糖 10 1.1.2 动物多糖 10-11 1.1.3 海藻多糖 11 1.1.4 微生物多糖 11-12 1.2 多糖的组成和结构分析 12-14 1.2.1 多糖结构的化学测定方法 12-13 1.2.2 多糖结构分析的酶降解法 13 1.2.3 多糖结构测定的仪器分析法 13-14 1.3 微生物胞外多糖的活性 14-16 1.3.1 免疫调节活性 14-15 1.3.2 抗肿瘤活性 15 1.3.3 降血糖和降血脂作用 15 1.3.4 抗氧化活性 15-16 1.4 微生物胞外多糖的应用 16-18 1.4.1 胞外多糖在医疗方面的应用 16 1.4.2 胞外多糖在食品行业的应用 16-17 1.4.3 胞外多糖在化妆品方面的应用 17-18 1.4.4 胞外多糖在环境方面的应用 18 1.5 本课题的目的、意义及主要研究内容 18-20 1.5.1 课题的目的和意义 18 1.5.2 主要研究内容 18-20 2 类芽孢杆菌ZC01的初步鉴定 20-29 2.1 材料与方法 20-25 2.1.1 主要试剂 20-21 2.1.2 主要仪器 21-22 2.1.3 菌种筛选来源 22 2.1.4 ZC01菌的初步鉴定方法 22-24 2.1.5 菌种的保藏 24 2.1.6 胞外产物性质的确定 24-25 2.2 结果与讨论 25-28 2.2.1 菌种的培养 25 2.2.2 菌株的初步鉴定 25-26 2.2.3 ZC01菌的DNA提取和PCR实验 26-27 2.2.4 ZC01菌的16S rDNA系统发育分析 27-28 2.3 本章小结 28-29 3 类芽孢杆菌ZC01发酵产胞外多糖条件的优化 29-36 3.1 材料与方法 29-30 3.1.1 实验材料与试剂 29 3.1.2 主要仪器 29-30 3.1.3 实验方法 30 3.1.4 实验设计 30 3.2 结果与讨论 30-35 3.2.1 碳源对发酵液粘度和产量的影响 30-31 3.2.2 氮源对发酵液粘度和产量的影响 31-33 3.2.3 pH值对发酵液粘度和产量的影响 33 3.2.4 温度对发酵液粘度和产量的影响 33-34 3.2.5 无机盐离子对发酵液粘度和产量的影响 34-35 3.3 本章小结 35-36 4 多糖的组成和组分的分析 36-46 4.1 材料与方法 36-40 4.1.1 主要试剂 36-37 4.1.2 主要仪器 37 4.1.3 胞外多糖的提取、制备、分离纯化 37-38 4.1.4 多糖粗品化学组成的测定方法 38-39 4.1.5 多糖结构的测定方法 39-40 4.2 结果与讨论 40-45 4.2.1 ZC01菌胞外多糖的制备,分离纯化 40-41 4.2.2 胞外多糖的化学组成 41-42 4.2.3 多糖结构的测定与分析 42-45 4.3 本章小结 45-46 5 胞外多糖的活性研究 46-53 5.1 材料与方法 46-49 5.1.1 实验材料与试剂 46 5.1.2 实验主要仪器 46-47 5.1.4 胞外多糖的吸湿和保湿作用的研究 47 5.1.5 胞外多糖抗氧化性能的研究 47-49 5.2 结果与讨论 49-52 5.2.1 胞外多糖的吸水保湿实验 49-51 5.2.2 胞外多糖的体外抗氧化实验 51-52 5.3 本章小结 52-53 6 结论 53-55 6.1 研究小结 53-54 6.2 本课题今后的研究方向 54-55 致谢 55-56 参考文献 56-63 发表文章 63
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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 其他化学工业 > 发酵工业 > 其他发酵工业
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