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积雪草苷对瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原与TGF-β_1mRNA表达的影响

作　者: 李珊珊
导　师: 王玮蓁
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 瘢痕成纤维细胞细胞增殖 Ⅰ、Ⅲ型胶原 TGF-β1
分类号: R275.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：瘢痕,是创伤后机体修复的必然结果,它不仅影响美观而且还会导致组织和器官不同程度的功能障碍。但是创伤修复是一个十分复杂的生物学过程,包含各种修复细胞和细胞因子等众多因素共同参与的细胞化学、分子生物学、免疫学过程。因此,如何减少瘢痕的形成,防治病理性瘢痕的增生与发展,一直也是皮肤科的棘手问题。一般认为瘢痕的形成机制主要是由修复细胞、细胞外基质、细胞因子及这三者之间的相互作用关系所组成,防治瘢痕的作用机理的研究也是围绕着这三方面进行开展的。本研究通过细胞体外实验的方法探讨中药积雪草苷对培养的原代瘢痕组织成纤维细胞形态影响,以及对细胞增殖活性与自分泌Ⅰ、Ⅲ胶原和TGF-β1mRNA的抑制作用,旨在为积雪草苷在皮肤科临床应用上提供一些理论依据。方法：1原代细胞培养无菌条件下,将手术切除的瘢痕组织放入含有青、链霉素的DMEM培养液中漂洗,采用组织块法培养原代成纤维细胞,经过免疫细胞化学鉴定成功后,取3-10代细胞用于实验研究。2细胞形态观察将对数生长期的瘢痕成纤维细胞以20%胎牛血清DMEM培养液调整成2×104/mL,接种于96孔培养板,200μL/孔,24小时后细胞贴壁,设置空白对照组,分别加入不同浓度药物在5%C02、37℃培养箱中继续培养24小时后在倒置显微镜下观察积雪草苷对瘢痕成纤维细胞(FB)形态变化的影响。3.MTT测定细胞增殖观察细胞形态后,每孔加入5mg/mL MTT 20μL,放入培养箱继续培养4小时,弃去液体,加入DMSO150μL/孔,震荡10min,用酶标仪检测在492nm处的吸光度值(OD值),检测不同浓度积雪草苷对瘢痕FB增殖的抑制作用。4. RT-PCR测细胞mRNA将细胞接种于6孔板中,待细胞贴壁生长融合后,实验组加入低、高浓度的药液,培养24h后,取5×106个瘢痕疙瘩成纤维细胞,提取RNA按照反转录试剂盒说明进行cDNA的合成,合成后cDNA进行PCR扩增,检测积雪草苷对瘢痕FB自分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的影响。5.采用SPSS11-0统计软件包,数据均以均数±标准差(x±s)表示,组间计数资料用t检验。结果：与对照组相比,积雪草苷药物浓度在0.1-1.0mg/mL范围内,实验组中瘢痕成纤维细胞体积缩小、变短,树突状突起回缩,细胞间隙变大,并且这种作用随着药物浓度的增加越明显；积雪草苷浓度在0.1-1.0mg/mL范围内,瘢痕成纤维细胞增殖能力受到明显抑制,且增殖的抑制效应与药物浓度及作用时间的变化呈量效关系；高浓度(1.0mg/mL)的积雪草苷对瘢痕成纤维细胞自分泌的Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1mRNA表达水平有抑制作用。结论：通过实验结果可以得出：体外实验中,在一定药物浓度范围内,中药积雪草苷可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖,减少细胞自分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1mRNA表达。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
缩略词表  9-10
前言  10-13
1. 实验材料  13-15
  1.1 材料来源  13
  1.2 实验仪器  13
  1.3 实验试剂  13-14
  1.4 试剂配制  14-15
  1.5 积雪草普药液的配制  15
2. 试验方法  15-17
  2.1 瘢痕成纤维细胞  15-16
  2.2 原代细胞鉴定  16-17
  2.3 细胞形态学观察  17
  2.4 MTT法检测细胞增殖  17
  2.5 RT-PCR测细胞Ⅰ、Ⅲ胶原和TGF-β_1mRNA  17
  2.6 统计学处理  17
3. 实验结果  17-23
  3.1 原代细胞鉴定  17-19
  3.2 积雪草苷对瘢痕成纤维细胞的形态的影响  19-20
  3.3 积雪草苷对瘢痕成纤维细胞增殖的影响  20-21
  3.4 RT-PCR检测胶原及TGF-β_1mRNA的表达  21-23
4. 讨论  23-29
结语  29-30
参考文献  30-33
综述  33-40
  参考文献  38-40
致谢  40

积雪草苷对瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原与TGF-β_1mRNA表达的影响

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