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体外诱导人脂肪间充质干细胞向表皮细胞和成纤维细胞分化

作 者: 韩娜
导 师: 刘晓明
学 校: 大连医科大学
专 业: 皮肤病与性病学
关键词: 脂肪间充质干细胞 诱导分化 表皮细胞 成纤维细胞
分类号: R329
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


背景:临床上常见的慢性溃疡、烧伤、外伤等造成的皮肤损伤,需要及时覆盖创面,以促进创面愈合及功能重塑。近年来,采用自体干细胞和生长因子的再生医学,为组织损伤的修复提供了新的思路,同时也为以细胞为基础的治疗提供了新的途径。研究表明,成体干细胞治疗,为组织损伤的修复提供了一种安全、有效的临床治疗方法。目的:采用人脂肪间充质干细胞(ADSCs)与EGF、bFGF、IGF-1、TGFβ1等生长因子进行体外诱导培养,从ADSCs的分离培养,到对其增殖能力和表面分子表达的检测,并从转录水平和蛋白水平进行系统分析。拟建立ADSCs向表皮细胞成纤维细胞诱导分化的规范实验体系。方法:从脂肪组织中分离ADSCs,并检测第3代和第10代ADSCs的表面分子表达及第3、5、10代ADSCs的细胞增殖情况。将ADSCs在含有EGF、bFGF、IGF-1等生长因子的诱导培养基中进行体外诱导培养,蛋白水平,免疫荧光检测CK 19的抗原表达,同时透射电镜下观察细胞超微结构。将ADSCs在含有TGFβ1、bFGF等生长因子的诱导培养基中进行体外诱导培养,转录水平,检测I型胶原的mRNA含量;蛋白水平,免疫荧光检测I型胶原的抗原表达,同时透射电镜下观察细胞超微结构。结果:(1)第3、10代ADSCs的CD90表达强阳性,CD34表达弱阳性,CD106表达阴性,第3、10代细胞均一性分别为94.2%,97.5%。第3代和第10代的ADSCs在细胞形态学、增殖能力和表面分子的表达方面无明显改变。(2)ADSCs在含有EGF、bFGF、IGF-1等生长因子的诱导培养基中进行体外诱导培养,第3天,部分细胞由梭形变成不规则形,第5天开始,细胞逐渐融合成铺石路样改变。免疫荧光结果显示,CK 19表达阳性,阳性率为15.6%。诱导15天后,透射电镜下,可见黑素小体、透明角质颗粒。(3)ADSCs在含有TGFβ1、bFGF等生长因子的诱导培养基中进行体外诱导培养,ADSCs诱导7天后,转录水平上,I型胶原的mRNA含量为对照组的两倍多;免疫荧光结果显示,与阴性对照组比,诱导组I型胶原蛋白的表达增加。诱导15天后,透射电镜下,可见胶原微纤维。结论:联合人脂肪间充质干细胞与EGF、bFGF、IGF-1、TGFβ1等生长因子进行体外诱导培养, ADSCs在一定条件下,可以向表皮细胞和成纤维细胞分化。从而,为皮肤组织再生提供了种子细胞的来源,同时也为皮肤损伤修复的临床应用提供了理论基础。

全文目录


中文摘要  7-9英文摘要  9-11前言  11-12材料与方法  12-24  第一部分 ADSCs 的分离培养及鉴定  12-17    实验材料  12-13    实验方法  13-15    实验结果  15-17  第二部分 体外诱导 ADSCs 向表皮细胞分化的研究  17-20    实验材料  17-18    实验方法  18-19    实验结果  19-20  第三部分 体外诱导ADSCs 向成纤维细胞分化的研究  20-24    实验材料  20-21    实验方法  21-23    实验结果  23-24讨论  24-28结论  28-29参考文献  29-34综述  34-43  参考文献  39-43致谢  43

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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