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黄酒中活性肽的分离纯化的研究

作　者: 陆丽利
导　师: 李燕
学　校: 上海海洋大学
专　业: 应用化学
关键词: 黄酒 高速逆流色谱 分离纯化 ACE抑制肽
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


黄酒是我国的民族特产,被视为养生保健佳品,对心血管疾病等有很好的疗效,但是缺乏实验支持。本研究以黄酒中的活性多肽为研究对象,研究了活性多肽的分离纯化方法及血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的测定。采用大孔树脂对黄酒中的多肽进行初步分离,从5种大孔树脂中筛选出适合分离多肽的树脂,探究该树脂的最佳吸附和分离条件,结果表明:DA201-C树脂对多肽吸附量大,解吸率高,该大孔树脂富集黄酒中多肽的最佳条件为:上样流速0.5BV/h,上样浓度为3.2mg/ml,洗脱溶剂为70%的乙醇,洗脱流速为1BV/h。DA201-C树脂对多肽的等温吸附在25℃时,能很好的符合Langmuir吸附等温式和Freundlich方程,两者的相关系数分别为0.998和0.993,此时最大吸附量Qm为40mg/g,Kl为0.04。大孔树脂吸附前后的样品经高效液相色谱分析,结果显示其纯度大大增加,由6.8%提高到66.7%,纯化倍数为9.8。采用高速逆流色谱和反相层析法,对多肽粗品进行进一步分离纯化。通过对各溶剂系统分层时间、上下相体积比、分配系数的比较及分析型HSCCC的对溶剂体系的快速筛选,最终确定了甲基叔丁基醚:乙腈:水2:2:3体系,加入的溶剂对是三氟乙酸和氨水。制备型HSCCC在制备样品的过程中,对主机转速、循环水浴温度以及上样浓度进行了优化,最佳操作参数为转速900r/min,温度25℃、上样浓度10mg/ml、流动相流速为1.8ml/min。对HSCCC分离出的组分P1进行SOURCE 5RPC反相层析,得到组分P1-1与P1-2。经进一步分析显示P1-1为单一峰,氨基酸组成为Thr、Ser、Gly、Ile和Phe,其中Ile和Phe对ACE抑制肽的生物活性有重要作用。采用高效液相色谱法,检测了组分P1的体外ACE抑制活性,结果显示组分P1有较强的ACE抑制活性,其IC50为0.61mg/ml。

全文目录


摘要  2-3
ABSTRACT  3-9
第一章 绪论  9-20
  1.1 黄酒的概况  9-11
    1.1.1 黄酒的基本营养成分  9-10
    1.1.2 黄酒的功能性成分  10-11
  1.2 酿造酒中活性多肽的研究  11-15
    1.2.1 葡萄酒相关研究进展  11-12
    1.2.2 黄酒中活性肽的相关研究  12
    1.2.3 活性肽的分离纯化  12-14
    1.2.4 ACE 抑制肽概述  14-15
  1.3 高速逆流色谱概述  15-19
    1.3.1 高速逆流色谱的工作原理及特点  15-16
    1.3.2 pH-区带逆流色谱的原理  16-18
    1.3.3 pH-区带逆流色谱的应用  18-19
  1.4 研究的目的、意义及内容  19-20
    1.4.1 研究的目的及意义  19
    1.4.2 研究内容  19-20
第二章 大孔树脂吸附分离黄酒中的活性肽  20-32
  2.1 材料  20-21
    2.1.1 主要实验材料  20
    2.1.2 主要仪器与设备  20-21
  2.2 实验方法  21-24
    2.2.1 树脂预处理及水分的测定  21
    2.2.2 样品粗液的制备及成分的测定  21
    2.2.3 树脂的筛选  21-23
    2.2.4 DA201-C 树脂的静态吸附实验  23
    2.2.5 洗脱剂浓度的选择  23
    2.2.6 DA201-C 树脂吸附热力学实验及上样量的确定  23
    2.2.7 动态吸附及洗脱  23-24
  2.3 结果与分析  24-31
    2.3.1 成分测定结果  24
    2.3.2 五种树脂吸附解吸效果  24-25
    2.3.3 DA201-C 大孔树脂的静态吸附曲线  25
    2.3.4 不同浓度乙醇解吸效果的确定  25-26
    2.3.5 DA201-C 大孔树脂吸附力学  26-29
    2.3.6 洗脱流速的确定  29
    2.3.7 DA201-C 大孔树脂吸附前后的液相图谱比较  29-31
  2.4 本章小结  31-32
第三章 黄酒中的活性肽的分离纯化  32-51
  3.1 材料  32-33
    3.1.1 主要实验材料  32
    3.1.2 主要仪器与设备  32-33
  3.2 实验方法  33-38
    3.2.1 多肽粗品的制备  33
    3.2.2 高速逆流色谱溶剂系统的筛选  33-34
    3.2.3 RP-HPLC 扫描  34
    3.2.4 溶剂系统参数的的测定  34-35
    3.2.5 分析性 HSCCC 的应用  35-36
    3.2.6 制备型逆流色谱的条件选择  36-37
    3.2.7 HELP 反相层析  37
    3.2.8 氨基酸组成测定  37-38
  3.3 结果与分析  38-50
    3.3.1 多肽粗品的高效液相色谱图谱  38
    3.3.2 各溶剂系统的测定参数  38-39
    3.3.3 分析性 HSCCC 的结果  39-43
    3.3.4 制备型 HSCCC 转速的确定  43-44
    3.3.5 水浴温度的确定  44-45
    3.3.6 流速的确定  45
    3.3.7 上样浓度的确定  45-47
    3.3.8 反相层析图谱  47-49
    3.3.9 氨基酸组成分析  49-50
  3.4 本章小结  50-51
第四章 黄酒中 ACE 抑制肽的活性测定  51-56
  4.1 材料  51
    4.1.1 主要实验材料  51
    4.1.2 主要仪器与设备  51
  4.2 实验方法  51-53
    4.2.1 试剂的配制  51-52
    4.2.2 马尿酸标准曲线  52
    4.2.3 体外 ACE 抑制活性实验方法  52
    4.2.4 RP-HPLC 法检测  52-53
  4.3 结果与分析  53-55
    4.3.1 马尿酸标准曲线及图谱  53-54
    4.3.2 体外降血压活性实验  54-55
  4.4 本章小结  55-56
主要结论  56-57
有待解决的问题  57-58
参考文献  58-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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