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RNA干扰Cat S基因对肝癌细胞MHCC97-H生物学行为的影响

作　者: 樊奇
导　师: 徐静
学　校: 广西医科大学
专　业: 外科学
关键词: 组织蛋白酶S 肝癌 细胞增殖 细胞凋亡 细胞侵袭
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


背景及目的：肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内最常见的肿瘤之一,我国每年HCC死亡病例数占全球总数的55%,其年死亡率为我国肿瘤死亡率的第二位。研究表明,即使早期手术切除小肝癌,5年内仍然有50%左右的转移复发率,使得对HCC发生侵袭转移的机制的研究成为提高HCC患者生存率的重中之重。近年来,在人类肿瘤与组织蛋白酶关系的研究中发现,组织蛋白酶S(cathepsin S,Cat S)介导的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解在许多肿瘤发生发展中起到了关键性的作用,尤其与肿瘤细胞的转移和肿瘤血管的生成的关系引起研究者的高度重视。课题组前期研究发现Cat S在肝癌组织、癌旁组织及癌栓中高表达,而且其表达水平与门静脉浸润、肝外转移以及肿瘤分化程度有关,提示Cat S可能与HCC侵袭转移密切相关。本研究拟在前期研究的基础上,应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术靶向沉默Cat S基因,观察CatS基因沉默后对肝癌细胞生物学特性的影响,初步探讨Cat S基因在肝癌细胞增殖、调亡及侵袭转移中的作用。方法：1.采用实时荧光定量PCR(?)(?) Western blot检测Cat S在不同转移潜能肝癌细胞系中的表达情况,筛选出Cat S高表达的肝癌细胞系进行下一步实验；2.设计三对针对Cat S基因的small interfering RNA(siRNA),转染MHCC97-H细胞后,用实时荧光定量PCR及Western blot检测干扰效率,筛选出干扰效率最高的siRNA用于下一步实验；3.转染siRNA靶向沉默Cat S基因后,用MTT法检测肝癌细胞MHCC97-H的增殖情况,流式细胞仪检测MHCC97-H细胞的凋亡率,Transwell小室检测沉默Cat S基因后对MHCC97-H侵袭能力的影响。结果：1.实时荧光定量PCR及Western blot结果显示,在肝癌细胞MHCC97-H中,Cat S在mRNA水平及蛋白水平均呈高表达,与正常肝细胞L02相比差异有统计学意义(P<0.05);2.用设计的三对siRNA转染肝癌细胞MHCC97-H48h后,通过实时荧光定量PCR和western blot检测Cat S基因表达下调情况,结果显示,Cat S基因在mRNA及蛋白水平的表达均被明显抑制,效果最好的siRNA干扰效率达到48%,与blank组及siRNA-NC组相比差异有统计学意义(P<0.05)；3.MTT结果显示,siRNA转染72h后,siRNA-1011组细胞增殖率低于blank组及siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡率测定结果显示,转染48h后,siRNA-1011组(42.2%±9.9%)凋亡率明显高于blank组(9.8%±7.1%)及siRNA-NC组(10.7%±7.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,siRNA-1011组穿膜细胞数(14.11±1.54)少于blank组(57.44±6.26)及siRNA-NC组(54.33±4.33),差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.Cat S在具有高转移潜能的肝癌细胞中高表达,提示Cat S可能与肝癌的转移有关；2.应用RNAi技术,用靶向沉默Cat S基因的siRNA转染肝癌细胞MHCC97-H,能够成功介导CatS基因沉默,达到靶向下调CatS基因表达的目的；3.沉默Cat S基因后,可导致肝癌细胞MHCC97-H的凋亡率增高,增殖及侵袭能力下降,提示Cat S可能成为肝癌治疗的一个新的靶点。

全文目录


英文縮略词表  4-6
摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-15
第一部分 组织蛋白酶S在不同转移潜能肝癌细胞中的表达  15-32
  1 实验材料  15-18
  2 实验方法  18-24
  3 统计学分析  24
  4 实验结果  24-27
  5 讨论  27-32
第二部分 构建靶向沉默Cat S基因表达的siRNA  32-46
  1 实验材料  32-35
  2 实验方法  35-37
  3 统计学分析  37
  4结果  37-41
  5讨论  41-46
第三部分 siRNA靶向抑制Cat S基因后对肝癌细胞MHCC97-H生物学行为的影响  46-57
  1 实验材料  46-48
  2 实验方法  48-49
  3 统计学分析  49-50
  4 结果  50-52
  5 讨论  52-57
结论  57-58
参考文献  58-63
综述  63-74
  参考文献  71-74
攻读硕士学位期间发表的学术论文  74-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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