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脑心通经由抑制树突状细胞成熟发挥抗动脉粥样硬化机制研究

作　者: 赵静静
导　师: 孙爱军
学　校: 复旦大学
专　业: 心血管内科学
关键词: 脑心通 动脉粥样硬化 血脂 巨噬细胞 平滑肌细胞 树突状细胞
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性血管疾病,可累及冠状动脉、脑血管、下肢动脉等全身动脉系统,引发冠心病、脑中风等疾病,严重影响人类健康和生活质量。AS是一种慢性炎症性疾病,树突状细胞(dendritic cell,DC)作为目前已知功能最强大的专职抗原提呈细胞,在炎症反应中起重要作用。我们前期研究发现致AS危险因素如氧化LDL、高血糖、糖基化终产物可通过DCs这一途径参与和放大AS免疫炎症反应,相反具有抗AS作用的曲格列酮、非诺贝特和他汀类药物可通过抑制DCs免疫功能,发挥抗AS炎症和稳定斑块作用。脑心通主要由黄芪、丹参、当归、川穹等组成,多个动物实验和临床研究证实,脑心通胶囊有抗AS的作用,但其具体机制尚未明确。我们用脑心通胶囊对高脂喂养小鼠进行干预,检验树突状细胞各指标,观察脑心通胶囊是否通过抑制树突状细胞成熟起抗动脉粥样硬化的作用。采用对低密度脂蛋白胆固醇受体敲除小鼠(LDLR-/-小鼠)进行高脂饲料喂养的方法建立动脉粥样硬化模型,选用健康的SPF级的8周龄LDLR-/-雄性小鼠,按随机分为以下4组：(1)高脂组：喂养普通高脂饲料(2)脑心通低浓度组：喂养高脂饲料+脑心通0.7g/kg/d；(3)脑心通高浓度组：喂养高脂饲料+脑心通1.4g/kg/d；(4)辛伐他汀组：喂养高脂饲料+辛伐他汀0.1g/kg/d.脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、辛伐他汀组药物分别按比例混进高脂饲料中配制,从造模第一天开始将无药和含药的高脂饲料喂养LDLR-/-小鼠,共喂养8周后取材。检测血浆中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白等血脂指标；油红0染色主动脉弓上的斑块,观察主动脉弓上斑块占主动脉弓面积的比例；对主动脉流出道进行冰冻切片,分别进行油红0、Masson三色染色,以及CD68、CD11c、alpha-actin免疫荧光染色,检测斑块面积、斑块中胶原、巨噬细胞、树突状细胞、平滑肌细胞；将脾脏研磨,对脾脏细胞经流式细胞仪进行检测,通过检测CD40、CD80、 CD86、MHC-Ⅱ等树突状细胞标记,观察DCs的成熟度,同时用ELISA检测血浆中IL-12等炎症因子指标。实验结果发现,与高脂组相比,脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、辛伐他汀组能明显降低血浆中LDL-C和总胆固醇,同时脑心通低浓度组、脑心通高浓度组还能降低甘油三酯。油红0染色主动脉和主动脉流出道斑块发现脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、辛伐他汀组较高脂组能明显抑制斑块形成；同时,脑心通低浓度组、脑心通高浓度组斑块中的巨噬细胞较高脂组的下降。另外,脑心通高浓度组主动脉流出道斑块中平滑肌细胞和胶原的比例较高脂组的比例上升。在DCs检测中,与高脂组相比,脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、辛伐他汀组的主动脉流出道斑块DCs表达下降；与高脂组相比,脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、他汀组的DCs的CD40、CD80、CD86比例下降,同时脑心通高浓度组的DCs的MHC-Ⅱ比例也下降；另外血浆检测中,与高脂组相比,用药各组的IL-12明显下降,这都提示脑心通有抑制树突状细胞成熟的作用。综上所述,脑心通可能部分通过抑制树突状细胞成熟起抗动脉粥样硬化的作用。第一部分脑心通在LDLR-/-小鼠中抗动脉粥样硬化的作用目的：研究脑心通胶囊对高脂喂养LDLR-/-小鼠抗动脉粥样硬化的作用。方法：8周龄LDLR-/-雄性小鼠予以高脂喂养,随机分为4组：(1)高脂组：喂养普通高脂饲料(2)脑心通低浓度组：喂养高脂饲料+脑心通0.7g/kg/d；(3)脑心通高浓度组：喂养高脂饲料+脑心通1.4g/kg/d；(4)辛伐他汀组：喂养高脂饲料+辛伐他汀0.1g/kg/d.8周后取材,检测各组小鼠的甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白等血脂指标。同时对主动脉弓和主动脉根部斑块进行油红0染色,同时对主动脉根部斑块进行CD68、平滑肌细胞alpha-actin免疫荧光染色,检测斑块内的巨噬细胞和平滑肌细胞,和进行Masson三色染色法检测胶原。结果：血脂检测发现,与高脂组相比,脑心通低浓度组、高浓度组和他汀组的总胆固醇、LDL-C明显下降(P<0.05),同时,脑心通低浓度组、高浓度组能明显LDLR-/小鼠体内的甘油三酯含量(P<0.05),而高脂组与另外3组用药组的HDL-C则没有明显差异。与高脂组相比,脑心通低浓度组、高浓度组和他汀组能显著降低高脂喂养LDLR-/-小鼠的主动脉弓和主动脉根部斑块面积(P<0.01),而脑心通低浓度组、高浓度组斑块内巨噬细胞的比例(P<0.05)较高脂组下降；另外,脑心通高浓度组较高脂组能提高斑块内平滑肌细胞的比例(P<0.05)和胶原比例(P<0.05)。结论：脑心通能降低血浆中的胆固醇和甘油三酯浓度,并显著抑制斑块形成。同时,脑心通能下调斑块中巨噬细胞含量,增加斑块中平滑肌细胞和胶原含量。第二部分脑心通通过抑制树突状细胞成熟起抗动脉粥样硬化的作用目的：研究脑心通胶囊抗动脉粥样硬化是否通过抑制树突状细胞成熟的机制起作用。方法：用CDllc标记小鼠主动脉流出道斑块中的树突状细胞,通过软件分析计算高脂组、脑心通低浓度组、脑心通高浓度组、辛伐他汀组斑块中树突状细胞的比例；将小鼠脾脏研磨,对脾脏细胞经流式细胞仪进行检测,通过检测CD40、 CD80、CD86、MHC-Ⅱ等树突状细胞标记,观察树突状细胞的成熟度；通过ELISA检测小鼠血浆中IL-12、TNF-alpha等炎性相关因子。结果：与高脂组相比,脑心通低浓度组、高浓度组、辛伐他汀组的主动脉流出道斑块中树突状细胞的比例较高脂组的明显下降(P<0.05)。流式细胞检测发现,脾脏中的树突状细胞成熟标志物CD40、CD80、CD86明显下降(P<0.05),同时高浓度组中树突状细胞的MHC-Ⅱ较高脂组也明显下降(P<0.05)。而血浆检测中,与高脂组比较,脑心通低浓度组、高浓度组、辛伐他汀组的IL-12均明显降低(P<0.05)。结论：脑心通能减少斑块内树突状细胞附着,抑制树突状细胞成熟,下调血浆中的炎性因子,这提示脑心通可能部分通过抑制树突状细胞成熟起抗动脉粥样硬化的作用。

全文目录


英文缩写索引  4-5
中文摘要  5-8
Abstract  8-12
前言  12-15
第一部分 脑心通在LDLR-/-小鼠中抗动脉粥样硬化的作用  15-34
  材料与方法  15-21
  结果  21-31
  讨论  31-34
第二部分 脑心通经抑制树突状细胞成熟起抗动脉粥样硬化的作用  34-44
  材料与方法  34-37
  结果  37-42
  讨论  42-44
参考文献  44-48
全文总结  48-49
综述  49-55
  参考文献  52-55
附录  55-56
致谢  56-58

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血管疾病 > 动脉疾病
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