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中枢注射神经肽S引起的活动神经元分布-c-fos免疫组织化学证据

作　者: 闫琼
导　师: 侯一平; 姜信诚
学　校: 兰州大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 神经肽S 神经肽S受体 c-fos 免疫组织化学
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景及目的：新鉴定的神经肽S(neuropeptide S, NPS)前体mRNA主要表达于蓝斑核与Barrington核之间的无名核、三叉神经感觉主核及臂旁外侧核,而NPSR mRNA广范分布于多个脑区,如：大脑皮质、杏仁核复合体、海马下托、丘脑、下丘脑。NPS与NPS受体(neuropeptide S receptor, NPSR)高选择性结合引起细胞Ca2+内流及胞内cAMP水平增高。近期研究证实NPS参与睡眠与觉醒时相变化、运动、焦虑、学习记忆、摄食与能量代谢的调节,还与成瘾、镇痛、神经内分泌等多种生理与病理过程有关。上述研究提示NPS可能经其受体介导参与生理调节和病理失调过程。本研究运用神经系统功能活动形态定位法确定NPS在大鼠脑的作用靶点,利用即刻早期基因(immediate-early gene, IEGS) c-fos作为神经功能活动的标识物,揭示NPS中枢注射后活动神经元的分布,为阐明NPS参与生理与病理调节过程提供形态定位。方法：健康成年SD雄性大鼠(250-320g,n=12)随机分为两组：生理盐水组(n=6),NPS组(n=6)。经注射导管(直径0.6mm,长度28mm；AP：-0.9mm；ML+1.5mm；DV-3.3mm)10:00h分别注射生理盐水2.5μ1或等容量NPS1nmol,1.5h后,水合氯醛(420mg/kg)麻醉下经升主动脉灌注0.9%NaCl200m1,4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液300m1(0.1mol,pH7.4,4℃),脑分离后35%蔗糖磷酸盐缓冲液4-C48h。恒冷箱-20-C行全脑冠状切35μm。行浮片c-fos免疫组织化学,光镜下观察Fos免疫反应(immunoreactivity-IR)(?)中经元在全脑的分布,计数并统计分析两组间Fos-IR神经元数量在各核的变化。结果：1.端脑Fos-IR神经元分布与生理盐水组比较,NPS促Fos-IR神经元数量增加分别为端脑的梨形皮质399%(P<0.0001)；皮层第一感觉区200%、第二感觉区198%、第一运动区197%、第二运动区198%　(P<0.0001)；杏仁核皮质部296%、基底部214%、外侧区305%、中央区413%　(P<0.0001)、终纹床核110%(P<0.05)；海马CA1区203%、CA2区203%、CA3562%区、海马下托268%(P<0.0001)。2.间脑Fos-IR神经元分布与生理盐水组比较,NPS促Fos-IR神经元数量增加分别为间脑的下丘脑视交叉上核322%、室旁核108%、背内侧核274%、腹内侧核126%、弓状核267%、穹窿周核520%、结节乳头体腹侧核641%和背侧核586%、外侧区378%(P<0.0001)。3.脑干Fos-IR神经元分布与生理盐水组比较,NPS促Fos-IR神经元数量增加分别为脑干的上丘灰质层203%、下丘灰质层479%、导水管周围灰质263%、蓝斑202%、中缝背核210%、嘴侧中缝线核157%(P<0.0001)。结论：1、NPS激活下丘脑组胺能神经元结节乳头体核、orexin能神经元穹窿周核和下丘脑外侧区、视交叉上核、脑干去甲肾上腺素能神经元蓝斑核、5-羟色胺能神经元中缝背核和嘴侧中缝线核参与睡眠觉醒周期的调节。2、NPS激活杏仁核、下丘脑室旁核、脑干蓝斑核、中缝背核、嘴侧中缝线核神经元参与情绪的调节。3、NPS激活梨形皮质、杏仁体神经元参与嗅觉调节。4、NPS激活海马、杏仁体神经元参与学习记忆的调节。5、NPS激活下丘脑弓状核、背内侧核、腹内侧核、室旁核和下丘脑外侧区神经元参与摄食调节。6、NPS激活下丘脑orexin能神经元、室旁核神经元参与药物成瘾及依赖调节。7、NPS激活上丘、下丘神经元参与听觉、视觉调节。8、NPS激活导水管周围灰质、弓状核参与痛觉调节。9、NPS激活弓状核参与神经内分泌及植物神经调节。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
英文缩略词表  8-9
目录  9-11
前言  11-34
  1、神经肽S及其受体  11-22
  2、NPS-NPSR系统生理功能  22-32
    2.1 、促觉醒作用  22-25
    2.2 、抗焦虑作用  25-26
    2.3 、学习记忆  26-27
    2.4 、药物依赖与成瘾  27-28
    2.5 、摄食调节  28-29
    2.6 、痛觉调解  29-32
  3、c-fos  32-33
  4、立题依据  33-34
材料与方法  34-36
  1、实验动物与实验环境  34
  2、药品与试剂  34
  3、仪器与材料  34
  4、注射管植入  34
  5、实验分组及给药方法  34-35
  6、组织学准备  35
  7、c-fos免疫组化标记  35
  8、细胞计数及统计分析  35-36
结果  36-45
讨论  45-50
  1、NPS与睡眠觉醒周期调节  45-46
  2、NPS与情绪调节  46
  3、NPS与嗅觉调节  46-47
  4、NPS与学习记忆调节  47
  5、NPS与摄食调节  47-48
  6、NPS与药物依赖及成瘾调节  48
  7、NPS与听觉、视觉调节  48
  8、NPS与痛觉调节  48-49
  9、NPS与神经内分泌及植物神经调节  49-50
结论  50-51
参考文献  51-56
在读期间成果  56-57
致谢  57

中枢注射神经肽S引起的活动神经元分布-c-fos免疫组织化学证据

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