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异丙酚麻醉对小鼠脑内GABA能神经元激活作用的研究

作　者: 周扬
导　师: 张惠；武胜昔；汪伟
学　校: 第四军医大学
专　业: 麻醉学
关键词: 异丙酚 GAD67-GFP小鼠 GABA Fos 免疫组织化学激光扫描共聚焦显微镜
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

全身麻醉的发展已有160多年的历史,但全身麻醉的机理仍然不甚明了。尤其是全身麻醉的中枢机制,一直是麻醉学领域的研究重点和热点。近年来,异丙酚由于起效快、清除迅速和不良反应少等优点而被广泛应用于临床麻醉。但异丙酚作用于中枢神经系统的机制尚未完全阐明。离体和在体实验均表明异丙酚能增强GABA与GABAA受体的结合,增强抑制性突触后电流,从而达到麻醉的效果。但就其对突触前机制的研究甚少,异丙酚是否对GABA能神经传递的突触前神经元—GABA能神经元也有一定的作用将是本实验的重点。研究目的:观察异丙酚麻醉过程中谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠脑内Fos蛋白及GABA能神经元的活化情况,以了解突触前神经元在全麻机理中的可能作用,为阐明静脉麻醉药中枢神经系统的作用靶位及机制提供资料。研究方法:成年雄性GAD67-GFP基因敲入小鼠20只(第四军医大学基础部人体解剖学教研室提供)随机分为2组:C组(C Group):对照组,腹腔注射生理盐水;T组(T Group):实验组,又分为三个亚组T1(5 min),T2(30 min),T3(1 h)。采用腹腔注射异丙酚(130 mg/kg)麻醉,分别在注射后5 min,30 min,1 h进行行为学评分,按照评分标准打分,评价其麻醉状态。随后立即处死并取脑,制取脑薄片(片厚30μm),分套收集,应用免疫组织化学观察神经元活化标记物Fos在全脑的表达分布情况。用上述制备待用的脑薄片,进行GABA能神经元与Fos的免疫荧光双标染色。研究结果:1、行为学结果:在腹腔注射异丙酚后5 min、30min和1h时行为学评分分别为5 min时13分,30 min时14分,1 h时9分,表明5min和30min均能达到适度或深度麻醉效果,而1h时则处于过渡状态。2、对GAD67-GFP基因敲入小鼠脑内Fos蛋白表达的观察:与对照组相比,Fos在海马CA1、杏仁核(MeA)、丘脑室旁核(PV)、下丘脑室旁核(PaV)、齿状回(DG)、下丘脑腹内侧核(VMH)、中脑导水管周围灰质(PaG)的表达在三个时间点都有明显增加(P<0.05),在嗅球外丛状层(EPI)有表达但与对照组相比无明显差异(P>0.05)。3、对GAD67-GFP基因敲入小鼠脑内GABA和Fos蛋白共存表达的观察:腹腔注射异丙酚后5 min、30 min和1 h下丘脑腹内侧核有GABA与Fos共存,共存的细胞占该区域Fos阳性神经元分别为:T1:80.3%,T2:89.7%,T3:91.6%,C:24.9%。此外,在下丘脑室旁核也可见GABA与Fos共存,共存率为:T1:19.6%,T2:39.7%,T3:41.6%,C:8.6%。研究结论:静脉麻醉药异丙酚能诱导GAD67-GFP基因敲入小鼠脑内相关核团GABA神经元和Fos共存,并具有部位差异性。其中下丘脑腹内侧核GABA能神经元活化可能是异丙酚麻醉致意识消失的机制之一。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
文献回顾  12-25
实验研究  25-40
  实验一异丙酚麻醉对GAD67-GFP 基因敲入小鼠脑内FOS蛋白表达的观察  25-33
    1 材料  25-26
      1.1 主要试剂  25-26
      1.2 主要仪器  26
      1.3 谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠  26
    2 方法  26-28
      2.1 动物分组与麻醉模型的建立  26-27
      2.2 免疫组织化学染色  27
      2.3 统计学分析  27-28
    3 结果  28-32
      3.1 行为学评分结果  28
      3.2 免疫组化结果  28-32
    4 讨论  32-33
  实验二异丙酚麻醉对GAD67-GFP 基因敲入小鼠脑内GABA 和FOS共存表达的观察  33-40
    1 材料  33-34
      1.1 主要试剂  33-34
      1.2 主要仪器  34
    2 方法  34-35
      2.1 动物分组与麻醉模型的建立  34
      2.2 免疫荧光双标染色  34-35
      2.3 统计学分析  35
    3. 结果  35-38
    4 讨论  38-40
小结  40-41
参考文献  41-46
附录  46-47
个人简历和研究成果  47-48
致谢  48

异丙酚麻醉对小鼠脑内GABA能神经元激活作用的研究

内容摘要

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