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大蒜素诱导卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡机制研究

作　者: 梁笑倾
导　师: 谭布珍
学　校: 南昌大学
专　业: 妇产科学
关键词: 大蒜素 顺铂 卵巢癌 基因表达 SKOV-3/DDP 凋亡
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 53次
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内容摘要


目的：研究大蒜素作用于卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP后P53、Bax、Bcl-2等凋亡相关基因表达变化，探索大蒜素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：将SKOV-3/DDP细胞随机分为对照组、大蒜素组、顺铂组和大蒜素+顺铂组；大蒜素组仅加入浓度为40ug/ml的大蒜素，顺铂组加入浓度为40ug/ml的顺铂，大蒜素+顺铂组加入大蒜素和顺铂各40ug/ml，各组分别培养24h、48h。用MTT法测定各组细胞增殖抑制率，利用金氏公式计算两药的合用指数（q）分析两药联合应用的效果：q=E(AB)/[EA+(1-EA)×EB]，其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用时的抑制率，q=0.85～1.15表示两药作用相加；q>1.15表示两药作用协同；q<0.85表示两药作用拮抗[1]。RT-PCR方法观察各组基因P53、Bax、Bcl-2mRNA的表达， Western blot法观察各组P53、Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果：1、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组对SKOV-3/DDP细胞生长均有抑制作用，与空白对照组相比有统计学意义（P<0.05），大蒜素组抑制率高于顺铂组（P<0.05），大蒜素+顺铂组培养24h后对SKOV-3/DDP细胞抑制率高于其各自单用时对SKOV-3/DDP细胞的抑制率（P<0.05），大蒜素+顺铂组培养48h后对SKOV-3/DDP细胞抑制率高于顺铂组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率（P<0.05），但与大蒜素组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率间无统计学意义。其中大蒜素组、大蒜素+顺铂组对SKOV-3/DDP细胞的抑制率呈时间依赖性。大蒜素+顺铂组作用于SKOV-3/DDP细胞24小时后，合用指数分别为1.16；48小时后合用指数分别为0.85；根据金氏公式可以推测，两药合用24小时后的作用效果表现为协同作用；两药合用48小时后的作用效果表现为相加作用。2、顺铂组促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表达高于顺铂组、空白对照组(P<0.05)，大蒜素+顺铂组促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表达与大蒜素组间无统计学意义(P>0.05)。3、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因Bax mRNA及蛋白表达较空白对照组明显增加(P<0.05)，大蒜素组Bax mRNA及蛋白表达高于顺铂组(P<0.05)，大蒜素+顺铂组对Bax mRNA及蛋白表达高于其各自单用时Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05)。4、顺铂组抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组Bcl-2mRNA及蛋白表达量较顺铂组、空白对照组明显降低(P<0.05)，大蒜素+顺铂组Bax mRNA及蛋白表达低于大蒜素组(P<0.05)。结论：1、大蒜素对SKOV-3/DDP细胞生长有抑制作用，呈时间-效应关系。大蒜素对SKOV-3/DDP的抑制作用强于顺铂。大蒜素和顺铂间有协同/相加作用。2、大蒜素作用于SKOV-3/DDP细胞后，促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表达增高，而抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达降低，且优于顺铂。大蒜素与顺铂联合作用SKOV-3/DDP后促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表达增高，和抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达降低较各自单用组明显。3、大蒜素组促凋亡基因P53mRNA和蛋白表达量增多，伴随着促凋亡基因Bax mRNA和蛋白有显著性增高。表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是先诱导P53mRNA和蛋白表达，通过P53基因进一步诱导Bax mRNA和蛋白表达，发挥连锁凋亡激活效应。4、大蒜素组Bax蛋白显著性增高，同时伴Bcl-2蛋白表达量减低，表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是通过升高Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白，从而促进SKOV-3/DDP细胞凋亡。总之，大蒜素对SKOV-3/DDP细胞生长有抑制作用，诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡可能与促进P53、Bax的表达增高、Bcl-2的表达降低有关。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
英文缩写词表  10-11
第1章 引言  11-13
第2章 材料与方法  13-22
  2.1 实验材料  13-14
    2.1.1 细胞株  13
    2.1.2 主要药品与试剂  13-14
    2.1.3 主要仪器  14
  2.2 实验方法  14-21
    2.2.1 主要实验试剂配置方法  14-16
    2.2.2 建立稳定细胞培养系统  16
    2.2.3 细胞的传代  16
    2.2.4 细胞的冻存  16
    2.2.5 实验分组及给药方法  16-17
    2.2.6 MTT 法测量各组 SKOV-3/DDP 细胞株的增殖抑制率  17
    2.2.7 促凋亡基因 P53、 Bax 和抑凋亡基因 Bcl-2mRNA 表达检测  17-19
    2.2.8 促凋亡基因 P53、Bax 和抑凋亡基因 bcl-2 蛋白表达检测  19-21
  2.3 统计学方法  21-22
第3章 结果  22-31
  3.1 大蒜素组对 SKOV-3/DDP 细胞增殖抑制作用  22-23
  3.2 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对促凋亡基因 P53mRNA 的表达变化  23-24
  3.3 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对促凋亡基因 Bax mRNA 的表达变化  24-25
  3.4 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对抑凋亡基因 Bcl-2mRNA 的表达变化  25-27
  3.5 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对促凋亡基因 P53 蛋白的表达变化  27-28
  3.6 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对促凋亡基因 Bax 蛋白的表达变化  28-29
  3.7 大蒜素作用于 SKOV-3/DDP 细胞 24h、48h 后对抑凋亡基因 Bcl-2 蛋白的表达变化  29-31
第4章 讨论  31-35
  4.1 大蒜素对 SKOV-3/DDP 细胞的抑制作用  31-32
  4.2 大蒜素对 SKOV-3/DDP 细胞促凋亡基因 P53 的表达变化  32-33
  4.3 大蒜素对 SKOV-3/DDP 细胞促凋亡基因 Bax 的表达变化  33-34
  4.4 大蒜素对 SKOV-3/DDP 细胞抑凋亡基因 Bcl-2 的表达变化  34-35
第5章 结论  35-36
致谢  36-37
参考文献  37-40
攻读学位期间的研究成果  40-41
综述  41-47
  参考文献  46-47

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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