学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

东北地区和河北省致病疫霉SSR基因型分析

作　者: 赵磊
导　师: 蒋继志
学　校: 河北大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 马铃薯晚疫病致病疫霉(Phytophthora infestans) 分离纯化 SSR 基因型
分类号: S435.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 18次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界四大粮食作物之一,我国是世界最大的马铃薯生产基地之一。马铃薯生产的发展一直受到一些真菌病害的严重威胁,尤其是由致病疫霉(Phytophthora infestans de Bary)引起的马铃薯晚疫病,造成马铃薯的严重减产甚至绝产。最近几年由于致病疫霉群体遗传结构发生了变化,马铃薯晚疫病有加重流行的趋势,因此加强对致病疫霉群体遗传结构的研究,对指导马铃薯晚疫病的防治有重要意义。本次研究首先分离纯化了2008年采集于东北地区和河北省的致病疫霉菌株,然后利用两对SSR引物对分离纯化所得的菌株进行了SSR基因型分析,主要研究结果如下：1.于2008年在东北地区和河北省的17个不同地区共采集到192个马铃薯晚疫病病样,从中成功分离出97个致病疫霉菌株,平均分离成功率为51%。2.对致病疫霉的SSR-PCR反应体系中的一些重要参数进行了优化,建立了适合本实验室的致病疫霉的SSR-PCR反应体系：25μL反应体系中包括模板DNA 50ng；每种dNTPs浓度均为0.11mmol/L; 10×PCR Buffer 2.5μL; Primer-F和Primer-R的浓度均为0.5μmol/L; 0.7Taq DNA聚合酶；17.68μL超纯水。3.利用两对SSR引物Pi4B和Pi4G对以上97个致病疫霉菌株进行了基因型鉴定,共鉴定出6个SSR基因型：B-01、F-01、F-04、F-05、F-06和G-03。其中F-01基因型占所测菌株的72.1%,为主导基因型。4.经鉴定河北省的59株菌分别属于4种SSR基因型,分别是F-01、F-05、F-06和G-03,其中52株菌为F-01基因型,占88.1%,居绝对优势；黑龙江省的36株致病疫霉菌株分别属于F-01、F-04、F-06和G-03,其中17株为F-01基因型,14株为F-06基因型,分别占47.2%和38.9%；采自吉林省的1株致病疫霉属于F-01基因型,而辽宁省的1株则属于B-01基因型。5.跟前人报道的SSR基因型比较,结果表明,在河北省和黑龙江省,F-01主导基因型并没有发生变化,但在黑龙江省,F-06基因型有上升的趋势。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-10
第1章前言  10-20
  1.1 马铃薯晚疫病的发生及症状  10-11
  1.2 致病疫霉分离和纯化的研究  11-12
  1.3 致病疫霉DNA水平上遗传多样性的研究  12-18
    1.3.1 RFLP标记  12-14
    1.3.2 线粒体DNA(mtDNA)单倍型分析  14
    1.3.3 RAPD标记  14-16
    1.3.4 AFLP标记  16-17
    1.3.5 SSR标记  17-18
  1.4 本研究的目的和意义  18-20
第2章致病疫霉的分离和纯化  20-25
  2.1 材料及仪器  20
    2.1.1 马铃薯晚疫病病样  20
    2.1.2 供试培养基  20
    2.1.3 供试主要药品和试剂  20
    2.1.4 主要仪器和设备  20
  2.2 方法  20-21
    2.2.1 晚疫病病样的采集  20-21
    2.2.2 致病疫霉的分离  21
    2.2.3 致病疫霉的纯化以及保存  21
  2.3 结果与分析  21-23
    2.3.1 病害样品的采集  21-22
    2.3.2 菌株的分离和纯化  22-23
  2.4 讨论  23-25
第3章致病疫霉SSR基因型分析  25-47
  3.1 材料及仪器  25-28
    3.1.1 供试致病疫霉菌株  25
    3.1.2 供试培养基  25-26
    3.1.3 供试主要药品和试剂  26-27
    3.1.4 实验主要仪器  27-28
    3.1.5 SSR引物  28
  3.2 方法  28-34
    3.2.1 致病疫霉基因组DNA的提取  28-29
    3.2.2 模板DNA浓度与纯度的检测  29-30
    3.2.3 SSR反应体系的建立  30-31
    3.2.4 PCR产物检测  31-32
    3.2.5 扩增产物的分析  32-34
  3.3 结果与分析  34-44
    3.3.1 致病疫霉基因组DNA的提取  34-35
    3.3.2 SSR反应体系的建立  35-39
    3.3.3 SSR扩增结果  39-42
    3.3.4 SSR基因型分析  42-44
  3.4 讨论  44-47
    3.4.1 致病疫霉基因组DNA的提取  44-45
    3.4.2 致病疫霉SSR基因型分析  45-47
结论  47-48
参考文献  48-52
附录 (硕士期间文章发表情况)  52-53
致谢  53

东北地区和河北省致病疫霉SSR基因型分析

内容摘要

全文目录

相似论文