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Wif1-Fc融合蛋白的构建及其对恶性淋巴瘤的作用研究

作　者: 胡洁
导　师: 蔡真
学　校: 浙江大学
专　业: 内科
关键词: 白血病 Wnt Wif1 拮抗剂凋亡
分类号: R733.1
类　型: 博士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

实验背景与目的:Wnt拮抗因子基因沉默在恶性血液病的发生发展过程中起着重要的作用,可分泌型的Wnt拮抗因子调节Wnt经典途径。这些拮抗因子包括:Wif1和sFRPs,外源性表达拮抗因子可能调节Wnt信号,发挥抗肿瘤活性。有报道表明与IgG1的Fc片段融合的蛋白能够延长其在体内的半衰期。所以在本研究中我们构建了与IgG1-Fc片段重组融合的蛋白Wif1-Fc并研究了其在体外的抗恶性淋巴瘤的活性。实验方法:将人Wif1 cDNA与人IgG1的Fc片段eDNA融合形成Wif1-Fc基因,插入以CMV为启动子的腺病毒载体中,用重组的腺病毒感染293表达并分泌Wif1-Fc蛋白,重组的融合蛋白用Hi-tap protein A柱纯化。用重组融合蛋白与实体瘤和淋巴瘤细胞孵育,观察其作用,高三尖杉酯碱(HHT)用作化疗对照。实验结果:实体瘤细胞株用Ad-Wif1-Fc感染后能够表达Wif1-Fc融合蛋白,293细胞株既能够生产腺病毒也能高表达融合蛋白。SCID小鼠体内实验表明融合蛋白在体内也能保持其生物学活性。Wif1-Fc能够阻断淋巴瘤细胞系中Wnt信号的传递,下调其下游分子的表达,并诱导细胞凋亡,与HHT联合应用后可以增强其抗恶性淋巴瘤的疗效。结论:综上所述,我们成功的构建了Wnt拮抗分子Will与IgG1的Fc段融合基因Wif1-Fc,并能表达纯化融合蛋白Wif1-Fc。Wif1-Fc可以诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡,而与HHT化疗联合后疗效显著增加,所以Wif1-Fc可以作为恶性淋巴瘤化疗的辅助治疗。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-7
前言  7-10
第一章:表达重组蛋白的腺病毒载体的构建,重组蛋白的生产,纯化及鉴定  10-32
  1.实验材料  10-12
  2.实验方法  12-19
  3.统计学方法  19-20
  4.实验结果  20-28
  5.讨论  28-30
  6.参考文献  30-32
第二章:Wifl-Fc对恶性血液病的作用研究  32-51
  1.实验材料  32-34
  2.实验方法  34-38
  3.统计学方法  38-39
  4.实验结果  39-46
  5.讨论  46-49
  6.参考文献  49-51
文献综述一  51-61
  参考文献  58-61
文献综述二  61-69
  参考文献  67-69
附已发表的论文  69-82

Wif1-Fc融合蛋白的构建及其对恶性淋巴瘤的作用研究

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