学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

波形蛋白影响肝癌细胞恶性表型的实验研究

作　者: 李祖茂
导　师: 魏于全；文艳君
学　校: 四川大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 波形蛋白肝细胞癌恶性表型凋亡细胞周期免疫治疗
分类号: R735.7
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 133次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的癌细胞表达波形蛋白(vimentin，VIM)在临床上倾向为患者预后差的一个生物标志，但波形蛋白对肿瘤生物学功的影响仍存在明显的争议。本研究的主要目的是阐明波形蛋白与肝癌细胞恶性表型的相互关系及其机理。方法将波形蛋白基因开放阅读框(open reading frame，ORF，1401bp)克隆到质粒载体pcDNA3．1(+)，重组质粒和对照质粒稳定转染HepG2人肝细胞癌细胞株，波形蛋白的表达通过RT-PCR和流式细胞术测定。分别用细胞增殖试验和标准的被覆基质胶侵袭小室判断癌细胞的增殖活性和侵袭潜能，通过流式细胞术检测细胞周期。将野生型和稳定转染的HepG2细胞裸鼠皮下接种，观测其成瘤性的差异。移植瘤组织末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测凋亡，通过免疫组织化学探测移植肿瘤组织中与肿瘤生物表型有关的一些因子的表达水平。以重组质粒pcDNA3．1-VIM作为基因疫苗免疫BALB／c小鼠，观测其对纤维肉瘤细胞MethA和骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag14移植瘤的免疫疗效。结果DNA序列分析和限制性核酸内切酶消化证实重组载体已正确克隆，筛选获得稳定转染细胞HepG2-pV波形蛋白基因在RNA和蛋白水平均高表达；经体内外实验显示HepG2-pV细胞的增殖、侵袭力和裸鼠皮下移植瘤生长速度均降低，癌细胞凋亡增多，细胞周期受阻于DNA合成期(S期)。在选用的14种抗体免疫组织化学染色中，与稳定转染空质粒的HepG2-p细胞移植瘤组织比较，HepG2-pV细胞移植瘤免疫组织化学显示波形蛋白、Bcl-2和Caspase-3染色增强而PCNA和CD44染色减弱。用pcDNA3．1-VIM作为异种同源基因疫苗对间叶性肿瘤的免疫治疗无效。结论构建了重组质粒载体pcDNA3．1-VIM和建立了稳定高表达波形蛋白的癌细胞株HepG2-pV，增强肝癌细胞表达波形蛋白扰乱了细胞自身的稳态，引起癌细胞凋亡增加、细胞周期阻滞和一些与肿瘤生长侵袭有关的蛋白表达水平的改变，从而抑制其恶性表型。提示波形蛋白中间丝可以与其他蛋白相互作用，调控某些基因的转录或翻译水平。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
材料和方法  12-36
结果  36-57
讨论  57-62
结论  62-63
参考文献  63-68
综述  68-90
  参考文献  80-90
在读期间发表论文  90-91
致谢  91

波形蛋白影响肝癌细胞恶性表型的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文