学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

低频超声终止妊娠的实验研究

作　者: 李晓艳
导　师: 王泽华
学　校: 华中科技大学
专　业: 妇产科学
关键词: 低频聚焦超声兔终止妊娠胎盘组织细胞形态学变化光镜电镜凋亡凋亡基因 TUNEL
分类号: R169.42
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
下　载: 71次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的探讨低频超声终止早期妊娠的可能性。利用低频聚焦超声(353 kHZ)直接照射兔早孕胚胎，观察其抗孕有效性，检测有效抗孕声功率；同时观察低频聚焦超声有效抗孕声功率直接辐射兔胚胎后不同时间胎盘及子宫光镜和电镜下的形态学改变、胎盘组织细胞凋亡的变化和凋亡调控基因Fas、FasL、p53、Bax和Bcl-2表达的改变，以期为临床研究提供重要的实验依据。方法1．将妊娠第10 d摸胎确诊孕兔随机分成6组，孕兔麻醉后开腹，置双侧子宫于腹壁上，选取左侧子宫的全部着床胚胎为实验组，右侧为自身对照，分别用353 kHZ低频聚焦超声声功率30 W／cm~2×60 s、35 W／cm~2×60 s、40 W／cm~2×60 s、45 W／cm~2×60 s、50 W／cm~2×60 s和55 W／cm~2×60 s直接辐照胚胎着床点，照射后关腹继续饲养至妊娠第20 d(照后第10 d)，再次开腹，肉眼观察子宫内胚胎的发育情况，计算出对照组和实验组胚胎的死亡率，即照射后第10 d子宫内已死亡(包括已流产和死胎)的胚胎数与该侧照射前的胚胎数相比。2．将妊娠第10 d摸胎确诊孕兔随机分成6组，孕兔麻醉后开腹，置双侧子宫于腹壁上，将对照组妊娠第10 d、20 d各3只动物和353 kHZ低频聚焦超声6种声功率辐照组照后即刻(妊娠第10 d)、照后10 d(妊娠第20 d)各10只动物的部分胚胎取出，选取胎盘组织，生理盐水冲净血液后，一部分组织置4％多聚甲醛溶液中固定24 h，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察胎盘(子宫底蜕膜和绒毛)及子宫的组织学变化情况；另一部分组织置2.5％戊二醛溶液中前固定2 h以上，常规电镜包埋、超薄切片，H-600型透射电镜观察胎盘及子宫的超微结构的改变。3．妊娠第10 d摸胎确诊孕兔对照组胚胎(右侧子宫胚胎为自身对照)不照射，实验组(左侧子宫胚胎)选用已证实为完全终止孕兔早孕声功率(353 kHZ低频聚焦超声40 W／cm~2×60 s)辐照胚胎，留取正常妊娠第10 d和照射后24、48、72、96、120、168、192 h的胎盘组织，生理盐水洗净血液后置4％多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋、切片，末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL reaction)技术观察胎盘组织细胞的凋亡情况。4．免疫组织化学(immunohistochemistry)技术检测353 kHZ低频聚焦超声40 W／cm~2×60 s辐照胚胎后24、48、72、96、120、168、192 h胎盘组织细胞Fas、FasL、Bax和Bcl-2蛋白的表达改变。5．原位杂交(In situ hybridization)技术检测353 kHZ低频聚焦超声40W／cm~2×60 s辐照胚胎后24、48、72、96、120、168、192 h胎盘组织细胞p53 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA的表达改变。结果1．对照组胚胎总死亡率为12.65％(32／253)。照射组中声功率30 W／cm~2、35 W／cm~2及≥40 W／cm~2组的胚胎死亡率分别为25.00％(12／48)、72.88％(43／59)和100％(64／64、43／43、40／40、35／35)；从35 W／cm~2组开始胚胎死亡率剧增，与对照组相比有非常显著的统计学差异(P＜0.005)。2．353 kHZ低频聚焦超声辐照后的即刻改变：光镜下主要为胎盘(绒毛及子宫蜕膜)出血、坏死；电镜下胎盘细胞正常结构消失，子宫平滑肌、内膜上皮细胞中线粒体肿胀。变化随剂量的增加而明显。照射后10 d观察：光镜下见绒毛、蜕膜细胞仍有变性或坏死；电镜下胎盘组织细胞坏死呈致密团块状，子宫内膜上皮、平滑肌及血管内皮细胞均未见异常。3．353 kHZ低频聚焦超声40 W／cm~2×60 s照射后24、48、72、96、120、168 h胎盘组织凋亡细胞数量与对照组相比均有显著差异(P＜0.05)；照射后24h凋亡细胞开始增加，照射后96 h凋亡细胞增加最多，与其他各组相比差异均有显著性意义(P＜0.05)；照后192 h凋亡细胞数量接近对照组水平，两者相比差别无显著性(P＞0.05)。4．353 kHZ低频聚焦超声40 W／cm~2×60 s照射胚胎后48、72、96、120、168 h胎盘组织细胞Fas蛋白、FasL蛋白、p53 mRNA、Bax蛋白和mRNA表达阳性率与对照组相比均有显著升高，照射后96h增加至高峰，照射后192h接近对照组水平；照射后24、48、72、96、120、168 h胎盘组织细胞表达Bcl-2蛋白和mRNA的水平与对照组相比均有显著降低，照射后96h下降至最低点，照后192h接近对照组水平。结论1．低频超声抗早孕具有潜在的可行性，值得进一步研究。2．胎盘较子宫对低频超声更敏感，更易受损，子宫照射后变化轻微且可恢复。3．低频聚焦超声(353 kHZ)辐照兔胚胎可诱导胎盘组织细胞凋亡增加，但有时间依赖性，即可复性。4．低频聚焦超声(353 kHZ)辐照兔胚胎可诱导胎盘组织细胞Fas、FasL、p53和Bax表达增加，Bcl-2表达下降，从而诱导胎盘组织细胞凋亡增加，但具有时间依赖性，即可复性。本研究的创新性1．首次使用353 kHz低频聚焦超声进行终止早期妊娠实验研究。2．首次检测低频聚焦超声辐照胚胎后不同时间胎盘组织细胞的凋亡变化情况。3．首次检测低频聚焦超声辐照胚胎后不同时间胎盘组织细胞凋亡调控基因的表达改变。

全文目录

一、中文摘要  5-8
二、英文摘要  8-14
三、前言  14-16
四、实验一、低频超声抗兔早孕的声功率研究  16-20
五、实验二、低频超声抗兔早孕的形态学研究  20-28
六、实验三、低频超声辐照兔胚胎对胎盘组织细胞凋亡的影响研究  28-33
七、实验四、低频超声辐照兔胚胎后胎盘组织细胞凋亡基因的表达改变研究  33-54
八、讨论  54-59
九、全文小结  59-60
十、参考文献  60-63
十一、综述  63-71
十二、攻读博士期间发表论文及申请课题情况  71-73
十三、致谢  73-74

低频超声终止妊娠的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文