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弓形虫病和广州管圆线虫病的免疫学诊断研究

作　者: 李华
导　师: 陈晓光
学　校: 第一军医大学
专　业: 病原生物学
关键词: 弓形虫病广州管圆线虫病免疫诊断重组抗原 ELISA试剂盒抗原纯化
分类号: R446.61
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

第一篇基于rSAG1蛋白的弓形虫ELISA试剂盒的构建及应用弓形虫对人类危害严重。诊断在弓形虫病的防治中非常重要。而目前从诊断标准、检测指标到市售试剂盒的检测效果都存在着争议和差距。其重要原因之一在于所采用的虫体粗抗原成份复杂且难以标准化。弓形虫主要表面抗原1(SAG1)是目前国内外研究较多的具有强免疫原性的优势诊断分子,本室前期工作已实现了SAG1在大肠杆菌的可溶性表达,且证实其具有良好的免疫反应性。本文在此基础之上,进行了以下研究: 1.标准血清的鉴定标准血清的确定是评判试剂盒质量的前提,本研究采用免疫电镜技术确定免疫兔血清、SAG1单克隆抗体和正常兔血清中针对膜抗原的抗体的有无,并以此作为标准参考血清,建立玻片虫体酶联染色试验(TSHE)和免疫印迹试验(IB)方法;用TSHE和IB确定了一批弓形虫IgG和IgM抗体阳性和阴性血清,为评价基于重组抗原的弓形虫检测试剂盒提供了可靠的标准血清。 2.弓形虫rSAG1蛋白的表达、纯化及鉴定标准化试剂盒的构建需要规模化生产抗原,以摇菌方式获得目标蛋白因较难避免抗原的批间差异而满足不了需要。本研究比较了摇菌、普通发酵和高密度发酵3种工艺生产重组弓形虫主要表面抗原1(rSAG1)的表达量和产量。结

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