学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

蚂蟥抗凝血的活性成分研究

作　者: 刘君
导　师: 杨松松
学　校: 辽宁中医学院
专　业: 生药学
关键词: 水蛭 蚂蟥 抗凝血 活性成分
分类号: R284
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 529次
引　用: 4次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


蚂蟥为水蛭科动物蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)的干燥全体,俗称宽体金钱蛭,是传统的活血化瘀药,具有破血通经,逐瘀消癥之效,为中国药典(2000版)收载的水蛭的三个品种之一。现代诸多的药理实验表明,蚂蟥具有抗凝血、抗血栓、抗血小板聚集等药理活性。为了进一步的探讨其药理作用的物质基础,本实验对蚂蟥抗凝血的活性成分进行了较为深入的研究。 为了避免炮制品对蚂蟥化学成分产生的影响,本实验的化学成分研究采用蚂蟥的鲜品,即秋季捕捉、采集后,置-20℃保存后备用。 首先,以凝血时间为指标,优选了蚂蟥的提取溶媒,即分别考察了用蒸馏水提取、生理盐水提取、不同浓度乙醇提取(30%,50%,75%,95%)、正丁醇提取、正己烷提取、磷酸盐缓冲液提取的提取液对家兔全血凝固时间的影响,而最终选择了用生理盐水提取。以蛋白质的含量和抗凝效价为指标,通过正交设计优选了总蛋白的最佳提取工艺,即采用生理盐水提取二次,第一次5倍量,第二次3倍量,每次冷浸2小时的工艺方法。采用盐析法进行初步的纯化,并分别采用CM-Sepharose、DEAE-Sephadex A-50、Sephacryl S-200HR、Sepharose F.F等凝胶层析方法和制备电泳等手段分离纯化了蚂蟥抗凝血的活性成分,共得到了10个组分,经检测有9个是蛋白质,其中有三个(MH-3、MH-6、MH-7)能延长家兔全血的凝血时间及其血浆复钙时间,而MH-3和MH-6的作用较显著。药理实验表明,MH-3和MH-6均能明显的延长小鼠断尾出血时间及以毛细玻管法测定的小鼠凝血时间,表明具有较强的抗凝血作用。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定了其中MH-3、MH-4、MH-5、MH-6、MH-7、MH-8、MH-9、MH-10的分子量,分别为15580Da、16960Da、20230Da、22020Da、24420Da、31880Da、33770Da、46440Da;并尝试用质谱法(Mass-spectrometry)测定了MH-2的分子量约为12042Da:用氨基酸自动分析仪分析了MH-3、MH-6、MH-7的氨基酸组成。 对比了蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)和水蛭(Hirude nipponica Whitman)的干品药材的抗凝血活性、氨基酸组成和二者蛋白质的电泳指纹图谱。对蚂蟥的干品药材进行了指纹图谱的质量标准研究和脂肪酸的组成分析。对蚂蟥鲜品的提取物进行了质量标准研究。

全文目录


ABSTRACT  5-7
摘要  7-8
前言  8-9
第一章 水蛭的文献研究  9-14
  第一节 水蛭的本草学研究  9-10
  第二节 水蛭的现代研究  10-14
    一 水蛭的品种考证  10-11
    二 水蛭的化学成分研究  11-12
    三 水蛭的药理作用研究  12-14
第二章 蚂蟥抗凝血的活性成分研究  14-39
  第一节 蚂蟥抗凝血活性部位的提取、分离和纯化  14-24
    一 活性部位的筛选  14-15
    二 提取工艺考察  15-18
    三 蚂蟥抗凝血活性蛋白的初步纯化  18-19
    四 脱盐  19
    五 提取工艺  19-22
    六 蚂蟥抗凝血活性蛋白的分离与纯化  22-24
  第二节 理化测试  24
  第三节 单体蛋白的纯度检查  24-27
    一 高效液相色谱法  24-25
    二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法  25-27
  第四节 单体蛋白的活性检测  27-29
    一 对家兔全血凝固时间的影响  27-28
    二 对家兔血浆复钙时间的影响  28-29
  第五节 氨基酸组成分析  29-33
  第六节 分子量测定  33-39
    一 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法  33-35
    二 质谱法  35-39
第三章 蚂蟥提取物的质量标准研究  39-48
  第一节 蚂蟥提取物中蛋白质的含量测定  39-41
  第二节 蚂蟥提取物的效价测定  41-43
  第三节 蚂蟥提取物的电泳指纹图谱研究  43-48
第四章 蚂蟥药材的脂肪酸组成分析  48-50
第五章 蚂蟥药材的指纹图谱研究  50-56
第六章 药效学研究  56-62
  第一节 蚂蟥提取物的药效学研究  56-57
  第二节 单体蛋白MH-3的药效学研究  57-59
  第三节 单体蛋白MH-6的药效学研究  59-62
第七章 蚂蟥与水蛭药材的对比研究  62-65
  第一节 电泳图谱的对比研究  62
  第二节 氨基酸组成的对比研究  62-64
  第三节 抗凝活性的对比研究  64-65
第八章 蚂蟥药材头部与尾部的抗凝活性的比较研究  65-66
创新点  66-67
参考文献  67-71
附图  71-95
致谢  95-96
综述  96-105
个人简历  105

相似论文

  1. 赤芍商品药材调查及品质评价研究,R282.71
  2. 不同类型亲水结构表面修饰聚氨酯的合成及其生物相容性研究,R318.08
  3. 枇杷花主要营养成分、酚类物质及其干燥工艺研究,TS272.5
  4. 抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5的功能研究,R543.5
  5. 核桃外果皮抑制人宫颈癌HeLa细胞活性成分筛选,R284
  6. 仿生细胞膜技术研究中药活性成分,R284
  7. 梧桐花和瑞香狼毒化学成分的研究,R284
  8. 再生汤对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响,R285.5
  9. 基于3T3-L1脂肪细胞的盐酸小檗碱结构修饰物体外改善胰岛素抵抗的活性成分筛选研究,R587.1
  10. 蜜炙对甘草化学成分及药理作用的影响,R283
  11. 水蛭化学成分与参元片提取工艺的研究,R284.1
  12. 蒙古黄芪活性成分及参芪扶正注射液质量标准研究,R284
  13. P11及其与水蛭素C肽融合基因的高效表达和功能的研究,Q78
  14. 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响及机制探讨,R735.7
  15. 蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和抗增殖作用的实验研究,R734.2
  16. 非增殖期糖尿病性视网膜病变病人血清VEGF，HbAlc的表达水平及水蛭提取物对恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF-6A细胞）的VEGFR-2表达的影响,R276.7
  17. 多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达,Q78
  18. 局部应用水蛭素对兔耳皮瓣静脉淤血影响的实验性研究,R285.5
  19. 煤氧化的反应机理函数和热效应的研究,TD752
  20. 中药水蛭对糖尿病大鼠早期肾脏病变干预作用的实验研究,R285.5
  21. 芪术药对抗氧化协同机制的研究,R285.5

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
© 2012 www.xueweilunwen.com