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基于3T3-L1脂肪细胞的盐酸小檗碱结构修饰物体外改善胰岛素抵抗的活性成分筛选研究

作　者: 唐光曦
导　师: 孟宪丽
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药理学
关键词: 3T3-L1前脂肪细胞 诱导分化 胰岛素抵抗 盐酸小檗碱结构修饰物 活性成分筛选
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：对现有3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化条件和胰岛素抵抗性质建立方法进行探索,寻求科学合理的实验方案,以满足改善胰岛素抵抗药物高通量筛选的需求。进而以盐酸小檗碱结构修饰物为研究对象,基于其对脂肪细胞胰岛素抵抗性质的影响,尝试筛选出改善作用优于盐酸小檗碱的结构修饰物。方法：1.采用噻唑蓝(MTT)法测定3T3-L1前脂肪细胞接种后84小时内的生长情况,绘制生长曲线,选择进行诱导分化的最适细胞状态。2.运用均匀设计对现有的诱导分化方案进行优化,获取最佳的诱导分化方法。3.对胰岛素在脂肪细胞胰岛素抵抗性质建立过程中的作用进行考察,探索建立能使脂肪细胞葡萄糖利用率显著降低,具有较典型的胰岛素抵抗性质的实验方案。4.基于上述研究所得3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立方法,以38个盐酸小檗碱结构修饰物为研究对象,考察其对脂肪细胞胰岛素抵抗性质的改善作用。结果：1.将3T3-L1前脂肪细胞接种后的第48小时,细胞增殖至接触抑制,在后续时间内细胞数无明显增长。此时细胞数目较多且活力较强,有利于细胞的诱导分化。故在细胞接种后的第48小时可以进行诱导分化。2.根据回归方程,得到3T3-L1前脂肪细胞最佳的诱导分化方法为：待细胞达到接触抑制后加入诱导分化培养液,其中含1μmol/L的地塞米松、0.5mmol/L IBMX及100μg/L胰岛素的DMEM完全培养液。作用48小时后,撤去地塞米松、IBMX,用1μg/L胰岛素再继续作用48小时,更换普通培养液培养13天。3.实验结果显示,胰岛素和地塞米松共同作用于脂肪细胞,比单独使用地塞米松,可使其胰岛素抵抗性质更为显著。故在诱导建立脂肪细胞胰岛素抵抗性质时应同时加入含地塞米松1μmol/L和胰岛素1μg/mL的诱导培养液。4.三次筛选结果表明,编号为：FB-48、FB-50、FB-79、FB-38、FB-41的盐酸小檗碱结构修饰物,能明显提高3T3-L1脂肪细胞葡萄糖利用率(p<0.05或p<0.01),具有较强的改善胰岛素抵抗作用。结论：1.本论文对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化及胰岛素抵抗性质建立的方法进行优化研究,得到更加科学合理的实验方案,且在后续的实验中,反复验证了该方案是可满足改善胰岛素抵抗药物高通量筛选的需求。2.本论文对盐酸小檗碱结构修饰物改善脂肪细胞胰岛素抵抗作用的研究表明：部分样品能明显改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(p<0.05或p<0.01),且作用均优于盐酸小檗碱,值得进一步的开发和研究。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-10
前言  10-15
  1 糖尿病与胰岛素抵抗的关系  10-12
    1.1 糖尿病流行病学调查  10
    1.2 中医对糖尿病的认识  10-11
    1.3 胰岛素抵抗与2型糖尿病  11-12
  2 胰岛素抵抗模型研究现状  12-13
    2.1 胰岛素抵抗动物模型  12
    2.2 胰岛素抵抗细胞模型  12-13
  3 脂肪细胞与胰岛素抵抗  13
    3.1 肥胖与胰岛素抵抗  13
    3.2 T3-L1细胞与胰岛素抵抗  13
  4 盐酸小檗碱对胰岛素抵抗的改善作用  13-15
第一章 3T3-L1前脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立方法研究  15-26
  1 实验材料  15-16
    1.1 仪器与试剂  15-16
    1.2 细胞株  16
  2 实验所需试剂的配制  16-17
  第一节 3T3-L1前脂肪细胞生长曲线的建立  17-20
    1 实验方法  17-18
      1.1 3T3-L1前脂肪细胞的接种培养  18
      1.2 噻唑蓝(MTT)孵育及测定  18
      1.3 3T3-L1前脂肪细胞生长曲线的建立  18
    2 统计学处理  18
    3 实验结果  18-20
    4 小结与讨论  20
  第二节 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化方法学研究  20-24
    1 实验方法  20-22
      1.1 3T3-L1前脂肪细胞的接种培养  20
      1.2 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化条件探究  20-22
    2 统计学处理  22
    3 实验结果  22-23
    4 小结与讨论  23-24
  第三节 脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立的方法学研究  24-26
    1 实验方法  24-25
      1.1 3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化  24
      1.2 脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立  24-25
    2 统计学处理  25
    3 实验结果  25-26
    4 小结与讨论  26
第二章 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响  26-35
  1 实验材料  26-27
    1.1 仪器与试剂  26
    1.2 细胞株  26-27
    1.3 受试样品  27
  2 实验所需试剂的配制  27
  3 实验方法  27-28
    3.1 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型葡萄糖利用的影响  27
    3.2 建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型  27-28
    3.3 受试药物作用  28
  4 统计学处理  28
  5 实验结果  28-33
  6 小结与讨论  33-35
第三章 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用影响的验证试验  35-41
  1 实验材料  35
    1.1 仪器与试剂  35
    1.2 细胞株  35
    1.3 受试样品  35
  2 实验所需试剂的配制  35-36
  3 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用率的影响(一次重复验证)  36-37
    3.1 3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化  36
    3.2 建立脂肪细胞胰岛素抵抗性质  36
    3.3 受试药物作用  36-37
  4 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用率的影响(二次重复验证)  37-38
    4.1 3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化  37
    4.2 建立脂肪细胞胰岛素抵抗性质  37
    4.3 受试药物作用  37-38
  5 统计学处理  38
  6 实验结果  38-40
    6.1 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用率的影响(一次重复验证)  38-39
    6.2 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用率的影响(二次重复验证)  39-40
  7 小结与讨论  40-41
第四章 结论与讨论  41-45
  第一节 主要实验结果与结论  41-42
    1 3T3-L1前脂肪细胞生长曲线测定  41
    2 3T3-L1前脂肪细胞诱导分化方法学研究  41
    3 脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立的方法学研究  41-42
    4 盐酸小檗碱结构修饰物对脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响  42
  第二节 讨论  42-45
    1 讨论  42-44
    2 不足与展望  44-45
参考文献  45-48
综述  48-57
  参考文献  54-57
致谢  57-58
公开发表的学术论文、专著及科研成果  58-59

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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