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芪术药对抗氧化协同机制的研究

作　者: 李金奎
导　师: 李大鹏
学　校: 山东农业大学
专　业: 食品科学与工程
关键词: 黄芪白术药对抗氧化协同作用活性成分
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

传统中草药是我国功能食品的重要组成原料之一,已有几千年的使用历史。中草药常以方剂配伍的形式应用于功能食品中,很多中草药在配伍使用时表现出比单独使用更好的药理功能。中药药对是复方的最小单位,是相对固定的两味草药的配伍形式,通常表现出药效增加、互助、减弱、拮抗等作用。黄芪白术(芪术)药对是医家常用药食兼用经典药对之一,在“芪术汤”和“补中益气汤”等方中均有体现,具有辅助治疗肾病、糖尿病等慢性疾病的作用。本文主要研究了芪术药对配伍前后乙醇提取物抗氧化能力和物质基础变化;研究了芪术药对配伍前后挥发油抗氧化活性、抑菌能力和化学成分的变化。芪术药对乙醇提取物体外抗氧化实验(清除ABTS·~+自由基能力和总抗氧化能力FRAP)结果表明,芪术药对配伍之后乙醇提取物存在抗氧化协同效应。芪术药对乙醇提取物物质基础的分析、鉴定采用HPLC-DAD-MS/MS联用技术,通过HPLC技术检测发现芪术药对乙醇提取物中有31个化合物,采用HPLC-DAD-MS/MS联用技术初步鉴定了其中的16个化合物。芪术药对乙醇提取物中潜在抗氧化成分的筛选、鉴定采用HPLC-DPPH方法。结果表明,芪术药对乙醇提取物中潜在抗氧化成分有11个,根据其UVλmax,MS,和/或MS/MS数据,初步鉴定出8个化合物,分别为:Ononin,9,10-dimethoxy-pterocarpan-3-O-β-D-glycoside , Claycosin , 3’-hydroxy-5’-methoxyisoflavone-7-O-β- D-glueopyranoside , Formononetin , AtractylenolideⅡ, Atractylenolide VI和Daucosterol。芪术药对配伍之后潜在抗氧化成分相对浓度比率分析显示,配伍之后Ononin和Claycosin相对浓度比率显著减小(P < 0.05),而component 6,Formononetin和Atractylenolide VI相对浓度比率显著增大(P<0.05)。外标法对Formononetin和Ononin的定量结果显示,配伍之后Formononetin浓度显著增大(P<0.05),而Ononin浓度显著减小(P<0.05)。配伍之后这些潜在抗氧化成分浓度变化或许是引起芪术药对乙醇提取物抗氧化活性增强的一个原因;另外,配伍过程中黄酮苷的水解可能是引起抗氧化活性增强的另外一个原因。芪术药对挥发油体外抗氧化实验(清除DPPH自由基和ABTS·~+自由基)和抑菌能力(抑制E. coli、M. luteus、B. subtilis、S. aureus、C. albicans、A. niger和H. anomala)结果表明,芪术药对配伍后挥发油在抗氧化能力和抑菌能力方面存在明显的协同作用。通过GC-MS联用技术分析了芪术药对配伍前后挥发油物质基础变化。结果显示,芪术药对挥发油物质基础不仅仅是两味药的简单加和:其中33个化合物来自白术,8个化合物来自黄芪,并且新检测到2个化合物:1,2,3,4,4a,5,6, 8a-Octahydro-α,α,4a,8-tetramethyl-[2R-(2α,4aα,8aβ)]-2-naphthalenemethan ol和Neoclovene oxide。芪术药对挥发油中潜在活性物质的筛选采用主成分回归(PCR)的方法。结果显示,有15个化合物对实验菌株(E. coli、M. luteus、B. subtilis、S. aureus、C. albicans、A. niger、和H. anomala)的抑制和清除DPPH和ABTS·~+自由基有重要贡献;另外还有8个化合物可能具有显著清除ABTS·~+自由基的效果。内标法定量结果表明,所有潜在活性成分在配伍之后浓度均有不同程度的升高,这可能是配伍之后芪术药对挥发油抗氧化和抑菌能力升高的原因。

全文目录

摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
1 引言  12-29
  1.1 药食兼用中草药在功能食品中的应用  12-13
  1.2 中草药抗氧化成分概述  13-17
    1.2.1 中草药抗氧化成分种类  13-14
    1.2.2 黄酮类化合物结构特征及分类  14-15
    1.2.3 黄酮类抗氧化剂构-效关系  15-17
  1.3 药对配伍理论及芪术药对概述  17-22
    1.3.1 药对配伍理论概述  17-19
    1.3.2 芪术药对概述  19-22
  1.4 中药物质基础研究概述  22-26
    1.4.1 中药配伍对化学成分的影响  22-24
    1.4.2 中药化学成分常用检测方法  24-26
  1.5 本研究目的意义及研究内容  26-29
    1.5.1 研究目的意义  26-28
    1.5.2 主要研究内容  28-29
2 材料与方法  29-38
  2.1 试验材料  29
  2.2 主要试剂及配制  29-31
    2.2.1 主要试剂药品  29-30
    2.2.2 主要试剂的配制  30-31
  2.3 主要仪器设备  31-32
  2.4 试验方法  32-38
    2.4.1 芪术药对及两味单药乙醇提取物提取方法  32
    2.4.2 芪术药对及两味单药乙醇提取物抗氧化能力测定  32-33
    2.4.3 芪术药对及两味单药乙醇提取物物质基础鉴定  33
    2.4.4 芪术药对及两味单药乙醇提取物抗氧化组筛选方法  33-34
    2.4.5 芒柄花苷和芒柄花素含量测定  34
    2.4.6 芪术药对及两味单药挥发油提取方法  34-35
    2.4.7 芪术药对及两味单药挥发油生物学活性测定  35-36
    2.4.8 芪术药对及两味单药挥发油物质基础分析鉴定条件  36-37
    2.4.9 芪术药对挥发油抗氧化组筛选  37
    2.4.10 数据统计分析  37-38
3 结果与分析  38-57
  3.1 芪术药对乙醇提取物抗氧化活性研究  38-39
    3.1.1 总抗氧化能力（FRAP）  38
    3.1.2 ABTS·+自由基清除能力  38-39
  3.2 芪术药对乙醇提取物物质基础分析  39-42
    3.2.1 高效液相色谱（HPLC）条件确定  39-40
    3.2.2 芪术药对乙醇提取物物质基础鉴定  40-42
  3.3 芪术药对乙醇提取物抗氧化组  42-45
    3.3.1 HPLC-DPPH 法分析芪术药对乙醇提取物抗氧化组  42-44
    3.3.2 芪术药对乙醇提取物抗氧化成分在配伍前后的变化  44-45
  3.4 芒柄花素和芒柄花苷的定量  45-46
    3.4.1 芒柄花素和芒柄花苷含量测定  45-46
    3.4.2 精密度试验和回收率实验  46
  3.5 芪术药对挥发油生物学活性研究  46-49
    3.5.1 芪术药对挥发油及两味单药抗氧化活性研究  46-48
    3.5.2 芪术药对挥发油抑菌活性研究  48-49
  3.6 芪术药对挥发油物质基础分析  49-53
    3.6.1 气相色谱(GC)条件的确定  49
    3.6.2 芪术药对挥发油物质基础鉴定  49-53
  3.7 芪术药对挥发油抗氧化组  53-57
    3.7.1 主成分回归分析芪术药对挥发油抗氧化组  53-55
    3.7.2 配伍前后芪术药对挥发油抗氧化组变化  55-57
4 讨论  57-60
  4.1 芪术药对乙醇提取物潜在抗氧化组分析  57
  4.2 芪术药对挥发油潜在抗氧化组分析  57-58
  4.3 芪术药对配伍前后成分变化的分析  58-60
5 结论  60-61
参考文献  61-70
附录  70-72
致谢  72-73
硕士期间发表论文情况  73

芪术药对抗氧化协同机制的研究

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