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养胃抗瘤冲剂对中晚期胃癌预后的影响及诱导细胞凋亡的分子机制

作　者: 何立丽
导　师: 孙桂芝；张培彤
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 胃癌细胞凋亡凋亡相关基因复发转移中医药治疗
分类号: R273
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

胃癌(Gastric carcinoma)是严重危害人类健康的最常见恶性肿瘤之一,由于术后复发、转移是临床大多数患者的致死主因,故人们一直在寻求手术以外治疗胃癌的方法,尽量延长患者的生存期。导师孙桂芝教授四十余年来从事中西医结合治疗恶性肿瘤,疗效显著,尤其在治疗以胃癌为主的消化道肿瘤方面经验尤为丰富。养胃抗瘤冲剂(YWKL)是导师研制的治疗中晚期胃癌的中药复方,以益气养胃、健脾补肾、活血化瘀、解毒抗癌为治则,临床应用二十余年,具有防止肿瘤复发、转移,延长患者生存期的作用。本论文在既往研究的基础上对导师治疗胃癌的理、法、方、药四个方面进行系统总结,探讨中医药治疗提高临床疗效的物质基础,并用现代科技手段进行实验研究,以615小鼠前胃癌术后复发转移模型和人胃癌细胞系MGC803、BGC823抗失巢凋亡及多细胞球体模型为载体,采用免疫组化(IHC)、RealtimeRT-PCR、AV-PI、流式细胞术、TUNEL、MTT等技术,从整体-细胞-基因-信号传导等层次,深入探讨了YWKL改善胃癌总体预后的分子机制,从一个侧面揭示了扶正祛邪并重的治疗原则延长中晚期胃癌生存期的科学内涵。1理论研究在既往研究的基础上,从理、法、方、药四个方面系统总结导师孙桂芝教授治疗胃癌的经验,探讨了中医药治疗提高临床疗效的物质基础。1.1胃癌病因病机的认识祖国医学虽无“胃癌”病名之记载,但对胃的证候及症状描述有很多与胃癌相似。分析胃癌临床证候特点,当属中医“胃脘痛”、“噎膈”、“心下痞”、“胃反”等范畴。导师通过总结古人相关论述及当代医家对胃癌病因、病机的认识,更结合自己40余年临床经验,认为脾胃虚损为胃癌发病最重要环节,各种原因引起的脾胃虚损,可进一步导致脾失健运、胃失和降,进而中焦壅滞,食积不化、气滞血瘀,蕴积生毒,最终发展成为胃癌。1.2治则治法导师在长期临床中通过辨证与辨病结合,强调以人为本,以脾肾为中心,兼调身心,协调内外；扶正驱邪,坚持守方,以“持久战”对抗胃癌及其复发转移。常用治法包括：健脾升清、和胃消食、祛瘀生新、抗癌解毒四法连用,在抑制肿瘤的复发及转移,稳定和缩小瘤体,有效提高生活质量和延长生存期方面取得了良好的效果。1.3常用“小范方”导师喜用经验方,经验方又多由数个“小范方”组成,如藤虎汤,组成：藤梨根、虎杖；蒲黄白芷蜂房汤,组成：生蒲黄、白芷、露蜂房、血余炭；金麦代赭汤,组成：鸡内金、生麦芽、代赭石等。2临床研究养胃抗瘤冲剂(YWKL)是导师孙桂芝教授研制的治疗中晚期胃癌的中药复方,以益气养胃、健脾补肾、活血化瘀、解毒抗癌为治疗原则。目的：通过对258例中晚期胃癌的非随机同期对照研究,·评价以YWKL复方加减辨证治疗对中晚期胃癌患者生存期及生存质量的影响。方法：采用回顾性同期对照研究方法,共纳入中晚期胃癌患者258例(中西医结合组147例,单纯化疗组111例),两组均采用化疗(入组后接受以氟尿嘧啶类为基础的方案化疗,并依据细胞病理学类型、体能状况等情况可联合运用铂类、葸环类或紫杉类药物,一般治疗3-6周期)等西医治疗；中西医结合组在此基础上加用YWKL。每两周辨证一次,在基本处方基础上修正中药处方,记录服药持续的时间。进行长期随访,数据的管理采用EPidata3.1软件建立数据库,采用Kaplan-Meier法估算中位生存时间,采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。结果：比较一年、三年、五年生存率,中西医结合组分别是：98.6%、84.4%、68.7%,单纯化疗组分别是：72.1%、12.6%、5.4%。比较中位生存时间,中西医结合组：72.69个月,单纯化疗组：21.94个月,经统计分析均有统计意义(P＜0.05)。比较治疗前后KPS评分变化,中西医结合组分别是：62.6%提高,32.6%稳定,4.7%下降,单纯化疗组分别是：27.9%提高,59.4%稳定,12.6%下降。比较治疗前后体重变化评价,中西医结合组分别是：53.1%提高,39.5%稳定,7.5%下降,单纯化疗组分别是：提高44.1%提高,25.2%稳定,30.6%下降。治疗前后KPS评分变化及体重变化评价比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：以YWKL为基础辨证治疗中晚期胃癌延长了患者生存期,提高了患者的生活质量。中医药治疗在改善胃癌总体预后方面的作用值得进一步作随机对照研究评价。3实验研究本课题在实验研究方面以615小鼠前胃癌术后复发转移模型和人胃癌细胞系MGC803.BGC823抗失巢凋亡及多细胞球体模型为载体,采用流式细胞技术FCM、TUNEL、AV-PI、Realtime RT-PCR、MTT、免疫组化等多种实验技术方法,从整体-细胞-基因-信号传导等层次,深入探讨了YWKL改善胃癌总体预后的分子机制,从一个侧面揭示了扶正祛邪并重的治疗原则延长中晚期胃癌生存期的科学内涵。3.1动物实验部分3.1.1成功建立和临床术后复发转移相类似的615小鼠前胃癌术后复发转移动物模型,为动态观察术后复发转移,研究复发转移的作用机制奠定了基础。3.1.2中药复方YWKL对于615小鼠前胃癌术后局部复发和远处肺转移有一定的抑制作用(复发瘤抑制率为68.07%和肺转移抑制率为33.33%),能明显控制肿瘤复发转移的程度,提高生存质量,延长生存期(生命延长率为100%)。3.1.3应用不同检测凋亡的方法,证实改变胃癌细胞的凋亡敏感性是YWKL防治复发转移的重要作用机制。3.1.4中药复方YWKL可以抑制端粒酶的增殖能力,通过促进线粒体释放Cytc,激活Caspase级联反应,从而提高促凋亡蛋白Smac、Apaf-1蛋白的表达,降低凋亡抑制蛋白XIAP表达。通过对端粒酶的增殖和凋亡两方面的检测可以探讨端粒酶对肿瘤细胞凋亡的影响,为应用中医药防治肿瘤复发转移提供新的思路和科学理论依据。3.2细胞实验部分3.2.1成功复制人胃癌细胞系MGC803、BGC823抗失巢凋亡及多细胞球体模型,很好的拟合体内肿瘤转移时的细胞状态,为验证YWKL复方抗转移的作用机理提供了可靠的技术平台。3.2.2采用血清药理学的方法应用正交设计制备了YWKL的含药血清,并通过MTT法动态观察和筛选出含药血清的最佳采血时间和有效浓度。3.2.3细胞凋亡信号传导紊乱是肿瘤发生复发转移的重要机制之一,中药复方YWKL的含药血清可以通过调控线粒体途径,提高人胃癌细胞系MGC803、BGC823的凋亡敏感性,最终激活凋亡效应型Caspase-3引起肿瘤细胞凋亡。4本研究主要创新之处本研究的创新之处主要有以下几点：4.1理论研究中,对导师孙桂芝教授治疗胃癌的理、法、方、药四个方面进行系统总结,探讨了中医药治疗提高临床疗效的物质基础,揭示了扶正祛邪并重的治疗原则延长中晚期胃癌生存期的科学内涵。4.2本论文对YWKL提高中晚期胃癌患者生存期、生存质量进行了较大样本分析,在临床取得明显疗效的基础上,以615小鼠前胃癌术后复发转移模型和人胃癌细胞系MGC803、BGC823抗失巢凋亡及肿瘤多细胞球体模型为载体,·从端粒酶增殖和线粒体凋亡转导通路相关调控因子活性与表达深入探讨了YWKL提高晚期胃癌预后总体效应的分子机制,研究从一个侧面揭示了扶正祛邪并重治疗晚期肿瘤的理论内涵,为深层次挖掘名老中医经验提供了新思路。4.3本研究引入人胃癌细胞系MGC803和BGC823抗失巢凋亡及多细胞球体培养模型,更好的模拟了肿瘤转移过程中细胞状态,进行失巢凋亡及中药复方研究,国内外未见报道,属方法创新。

全文目录

中文摘要  7-11
英文摘要  11-17
英文缩略词对照表  17-19
前言  19-22
  参考文献  21-22
第一部分理论研究  22-47
  第一章胃癌病因病机研究  22-28
  第二章治则治法  28-35
  第三章常用"小范方"浅析  35-41
  第四章胃癌患者饮食身心调摄  41-43
  参考文献  43-47
第二部分临床研究养胃抗瘤冲剂对中晚期胃癌患者预后的影响  47-66
  1 材料和方法  47-49
  2 诊断标准  49
  3 疗效标准  49-51
  4 结果和讨论  51-62
  5 讨论  62-65
  参考文献  65-66
第三部分体内实验研究  66-110
  第一章 615小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移模型的建立  66-71
    1 材料和方法  66-68
    2 结果  68-69
    3 讨论  69-70
    参考文献  70-71
  第二章养胃抗瘤冲剂对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移及生存期的研究  71-79
    1 材料和方法  71-73
    2 结果  73-75
    3 讨论  75-78
    参考文献  78-79
  第三章养胃抗瘤冲剂对小鼠前胃癌术后复发转移细胞凋亡的影响  79-88
    1 材料和方法  79-82
    2 结果  82-85
    3 讨论  85-87
    参考文献  87-88
  第四章养胃抗瘤冲剂对小鼠前胃癌术后肺转移灶凋亡相关蛋白及端粒酶表达的影响及其相关性  88-98
    1 材料和方法  88-91
    2 结果  91-94
    3 讨论  94-96
    参考文献  96-98
  第五章实时荧光定量PCR检测肺转移灶凋亡相关蛋白和端粒酶的表达  98-110
    1 材料和方法  98-103
    2 结果  103-105
    3 讨论  105-106
    参考文献  106-110
第四部分体外实验研究  110-130
  第一章复制人胃癌细胞系MGC803和BGC823抗失巢凋亡培养模型和多细胞球体模型  110-118
    1 材料和方法  110-112
    2 结果  112-115
    3 讨论  115-117
    参考文献  117-118
  第二章 MTT法测定养胃抗瘤冲剂对人胃癌细胞系MGC803和BGC823生长抑制作用  118-124
    1 材料和方法  118-120
    2 结果  120-122
    3 讨论  122-123
    参考文献  123-124
  第三章养胃抗瘤冲剂对人胃癌细胞系MGC803和BGC823细胞凋亡的诱导及分子机制研究  124-130
    1 材料和方法  124-126
    2 结果  126-127
    3 讨论  127-129
    参考文献  129-130
实验研究小结  130-132
总结  132-135
文献综述  135-183
  综述一中医健脾法治疗胃癌的研究进展  135-154
  综述二进展期胃癌的化疗及靶向研究进展  154-183
致谢  183-185
个人简历  185-188
附录  188-195

养胃抗瘤冲剂对中晚期胃癌预后的影响及诱导细胞凋亡的分子机制

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