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Apelin促进脂肪间充质干细胞增殖分化的分子影像研究

作　者: 梁栋
导　师: 王海昌；曹丰
学　校: 第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: Apelin 分子影像 间充质干细胞 缺氧 pAkt
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究背景及目的缺血性血管疾病是目前威胁人类健康的重要疾病,其中促进血管再生是目前治疗缺血性疾病的主要方向。在众多促进血管再生的治疗方法中,干细胞治疗缺血性疾病成为了近年来的研究热点。然而,很多研究包括我们以往的研究结果显示,成体干细胞尤其是间充质干细胞在移植后的存活数量较少而难以发挥长期的治疗作用。因此,如何促进成体干细胞在体内缺血部位的存活、整合、增殖并分化依旧是干细胞治疗研究的难点。Apelin是新发现的一种小分子活性肽,是血管紧张素受体-1相关受体蛋白（putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1,APJ）的内源性配体。具有重要的心血管调节功能:舒张血管、降低血压、保护心肌受损、增强心肌收缩力、拮抗血管紧张素Ⅱ对心血管系统的不良作用。同时对血管内皮细胞、心肌细胞具有保护作用。本实验将在我们以往研究的基础上,利用分子影像学等手段,观察Apelin对于间充质干细胞在缺氧条件下对细胞增殖所产生的影响以及Apelin对于干细胞保护作用的机制,并为下一步成体干细胞治疗的长期获益和不良影响进行可靠评估。方法第一部分:脂肪间充质干细胞的分离培养与鉴定:用酶消化法分离?-actin-luc FVB转基因小鼠的脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）,流式细胞术鉴定干细胞标志,生物发光成像确定细胞荧光素酶（Fluc）的表达。第二部分:不同浓度的Apelin对缺氧/复氧诱导的脂肪间充质干细胞增殖、凋亡的影响:建立缺氧（H）6h/复氧（R）2h细胞模型,分3组:①空白对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R+Apelin干预组(10-10-10-5mol/L)。MTT法和生物发光成像（BLI）测定各组细胞增殖率,TUNEL检测细胞凋亡。第三部分:Apelin对脂肪间充质干细胞在后肢缺血小鼠体内的作用:实验共分四组:假手术+AD-MSCs组、假手术+AD-MSCs+Apelin组、缺血+AD-MSCs组、缺血+AD-MSCs+Apelin组。酶消化法培养小鼠AD-MSCs,建立后肢缺血模型,在模型后肢缺血部位按分组注射AD-MSCs（1×106）或AD-MSCs+Apelin。生物发光成像检测细胞活性。第四部分:Apelin影响小鼠脂肪间充质干细胞增殖、凋亡的机制:建立缺氧（H）6h/复氧（R）2h细胞模型,分3组:①空白对照组;②1×10-6mol/L Apelin组;③Apelin+拮抗剂LY294002组(1×10-6)mol/L Apelin+20μmol/L LY294002)。免疫印迹法检测细胞内激酶磷酸化Akt的表达。结果1.流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞表达CD44及CD90,而且荧光素酶（Fluc）的表达与细胞数量呈线性相关。2.在缺氧环境中,Apelin的干预可显著增加AD-MSCs的增殖,抑制凋亡。3.Apelin可促进后肢缺血模型中AD-MSCs的存活。4.Western blot检测pAkt的表达在Apelin干预组明显高于对照组（P<0.05）。结论Apelin可通过Akt信号途径促进脂肪来源间充质干细胞的增殖,抑制缺氧诱导的凋亡发生,为干细胞的替代治疗提供新的辅助治疗靶点。

全文目录


缩略语表  6-8
中文摘要  8-11
ABSTRACT  11-14
前言  14-16
文献回顾  16-28
  1. 脂肪间充质干细胞  16-19
    1.1 脂肪间充质干细胞概述  16
    1.2 脂肪间充质干细胞的分离培养与鉴定  16-17
    1.3 脂肪间充质干细胞的多向分化能力  17-18
    1.4 脂肪间充质干细胞的临床应用  18-19
    1.5 脂肪间充质干细胞有待解决的问题  19
  2. Apelin  19-23
    2.1 Apelin-AP J 系统概述:  19-20
    2.2 Apelin 在心血管系统中的作用  20-22
    2.3 Apelin 在脂肪胰岛轴中的作用  22
    2.4 Apelin 在中枢神经系统中的作用  22-23
  3. 分子影像  23-28
    3.1 分子影像的概念及研究应用的现状  23-24
    3.2 分子影像在干细胞研究中的应用  24-28
第一部分 脂肪间充质干细胞的分离培养与鉴定  28-36
  1 材料  28-29
  2 方法  29-30
  3 结果  30-34
  4 讨论  34-36
第二部分 不同浓度的 Apelin 对缺氧/复氧诱导的脂肪间充质干细胞增殖、凋亡的影响  36-44
  1 材料  36
  2 方法  36-38
  3. 结果  38-42
  4 讨论  42-44
第三部分 Apelin对脂肪间充质干细胞在后肢缺血小鼠体内的作用  44-49
  1 材料  44
  2 方法  44-45
  3 结果  45-47
  讨论  47-49
第四部分 Apelin 影响小鼠脂肪间充质干细胞增殖、凋亡的机制  49-53
  1 材料  49
  2 方法  49-50
  3 结果  50-52
  讨论  52-53
小结  53-54
参考文献  54-68
个人简历和研究成果  68-69
致谢  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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