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骨髓间充质干细胞的营养效应对一氧化碳致星形胶质细胞损伤的影响

作　者: 赵旭生
导　师: 王苏平
学　校: 大连医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 骨髓间充质干细胞 营养效应 星形胶质细胞 一氧化碳
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有自我更新和多向分化的潜能,在不同的诱导条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞和神经细胞等多种类型的细胞。在治疗神经组织损伤中具有很大的潜力。目前有很多研究显示BMSCs移植有助于神经组织损伤的恢复,但是其恢复功能的确切机制仍然不完全清楚。虽然BMSCs的分化和细胞融合都可能促进神经功能的恢复,但其较低的存活率不可能完全解释神经损害的恢复水平。当前不断有证据显示BMSCs能够通过释放营养因子和细胞因子促进神经组织功能的恢复,而BMSCs本身不发生分化,此种功能称为MSCs的营养效应(trophic effects)。本实验排除BMSCs本身对星形胶质细胞(astrocyte,AS)的作用,使用BMSCs的条件培养液来研究BMSCs的营养效应对CO致AS损伤的影响,探讨BMSCs的营养效应及其临床开发应用。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁特性培养大鼠BMSCs。流式细胞仪检测BMSCs表面抗原的表达情况。当第3代的BMSCs铺满培养瓶底面积的80%左右时,更换含10%胎牛血清的DMEM培养液,培养24小时后收集上清,保存备用。无菌条件下进行大鼠脑皮质AS的培养,纯化,免疫细胞化学染色进鉴定。实验分组：①正常对照组：正常培养液,5%CO2培养箱中培养的AS;②CO组：正常培养液,1%CO+5%CO2培养24h的AS；③条件培养液保护组：分别加入30%、80%2个浓度的条件培养液置于1%CO+5%CO2培养24h,后置于5%CO2培养箱中培养24h和48h的AS；④条件培养液治疗组：正常培养液,1%CO+5%CO2培养24h后分别加入30%、80%2个浓度的条件培养液后置于5%CO2培养箱中培养24h和48h的AS。于倒置相差显微镜下观察一般形态学变化。采用计数板计数法检测各实验组细胞生长增殖情况。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测AS存活率。以比色法测定各实验组细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性；流式细胞仪测定各实验组细胞凋亡率。结果：1、AS的生长增殖隋况：AS在有CO存在的条件下培养24h后数量明显少于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后数量仍明显少于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组数量多于CO组(p<0.05),少于保护组,其中低浓度治疗组<高浓度治疗组。2、AS存活率的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后存活率明显小于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后存活率仍明显小于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组<高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24h后低浓度治疗组存活率略大于CO组(p>0.05),高浓度治疗组AS存活率明显大于CO组(p<0.05),小于保护组,其中低浓度治疗组<高浓度治疗组；AS在停用CO的条件下培养48h后治疗组存活率仍小于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度治疗组<高浓度治疗组。3、AS活性的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后LDH释放量明显多于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后LDH释放量仍明显多于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组的LDH释放量少于CO组,多于保护组,其中培养24h后低浓度治疗组略大于高浓度治疗组(p>0.05)；培养48h后低浓度治疗组明显大于高浓度治疗组(p<0.05)。4、AS凋亡的检测显示：AS在有CO存在的条件下培养24h后细胞凋亡率明显大于保护组和正常对照组(p<0.05),低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后细胞凋亡率仍明显大于保护组和正常对照组(p<0.05),其中低浓度保护组>高浓度保护组；AS在停用CO的条件下培养24、48h后治疗组凋亡率小于CO组(p<0.05),大于保护组,其中低浓度治疗组>高浓度治疗组。结论：CO可降低体外培养AS的生长速度；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应能够增加AS的生长速度。CO可降低体外培养AS的存活率；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应能够增加AS的存活率。CO可使体外培养AS的LDH释放量增加,破坏细胞膜的完整性；在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应可降低LDH释放量,保护细胞膜的完整性。CO可促进体外培养AS的凋亡;在CO致AS损伤前后加入BMSCs条件培养液,通过BMSCs的营养效应对损伤所致的细胞凋亡具有保护作用。

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摘要  5-7Abstract  7-10前言  10-11材料和方法  11-15结果  15-20讨论  20-26结论  26-27附图  27-28附表  28-30参考文献  30-32综述  32-40  参考文献  38-40致谢  40-41

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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