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人IGF-1对HIBD新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

作　者: 李丽琴
导　师: 初桂兰
学　校: 天津医科大学
专　业: 内科学
关键词: 胰岛素样生长因子-1 新生鼠缺氧缺血性脑损伤心肌细胞凋亡 Bcl-2 Bax
分类号: R722.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)大多由围生期窒息引起,是新生儿时期的常见疾病,是引起新生儿急性死亡和神经系统损伤的重要原因之一。缺氧是发病的核心,之后出现酸中毒、缺血；引发多脏器功能损伤,心肌功能也常常受损,甚至发生心力衰竭。近年研究发现,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在心血管疾病发病机制中起重要作用,可以促生长、促心肌细胞肥大再生、减少细胞凋亡等,这在心肌缺血再灌注损伤、严重烧伤后心肌缺血缺氧、心肌梗死、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)等模型中都有研究。在HIBD后,血液中IGF-1的水平降低,与脑损伤及神经细胞凋亡、胃肠功能障碍等众多疾病密切相关,因此其作为疾病治疗的手段受到了人们的密切关注,但在HIBD模型后的心肌损伤中少见报导。Bcl-2蛋白家族在细胞凋亡中起着关键性作用,Bcl-2及Bax的含量多少决定着凋亡的进展,IGF-1是细胞内的一个重要抗凋亡因子,它通过与细胞内许多参与细胞凋亡过程的信号蛋白相互作用,从而抑制细胞凋亡过程促进细胞生存。本实验通过制备新生大鼠HIBD模型,腹腔注射外源性重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1),观察不同剂量IGF对HIBD新生大鼠心肌组织Bcl-2及Bax蛋白表达及细胞凋亡的影响,探讨IGF心肌保护作用的分子机制,以期为临床治疗新生儿HIE后心肌损伤提供有效的方法和途径。方法1.制备HIBD模型：将新生7日龄Wistar大鼠行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8%O2,92%N2)处理2.5小时,制成HIBD模型。同时观察缺氧时动物行为变化,并于光镜下观察心肌组织病理改变。2.细胞凋亡及Bcl-2及Bax蛋白表达测定：40只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、IGF-1干预组,其中干预组又分为高、中、低剂量三组,每组8只动物,于缺氧结束后立即一次性腹腔注射给药,应用免疫组织化学染色方法及细胞凋亡原位检测法(TUNEL),观察给药72小时后Bcl-2及Bax蛋白表达变化并测定心肌组织内细胞凋亡情况。结果1.HE染色及光镜检查结果：假手术组：心肌组织结构及细胞层次清楚,细胞形态正常,无水肿。HIBD组：心肌细胞排列紊乱,结构不清,肌横纹模糊,部分细胞水肿,部分细胞膜破损、核溶解消失,部分细胞核固缩,细胞间有较多的炎细胞浸润。2.心肌细胞凋亡情况：假手术组仅见极少量细胞凋亡,HIBD组凋亡细胞明显增多,凋亡指数较假手术组显著增高,干预组凋亡细胞较HIBD组减少。假手术组与IGF-1高剂量干预组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)3.Bcl-2蛋白表达检测结果：Bcl-2蛋白在假手术组中存在低水平表达,HIBD后表达增高,干预组较假手术组及HIBD组更高。HIBD组与IGF-1低剂量干预组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)。4.Bax蛋白表达检测结果：Bax蛋白在假手术组中表达微弱,HIBD后表达明显增高,干预组较HIBD组表达降低,但高于假手术组,且与剂量呈相关性。各组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)结论1. HIBD后心肌细胞存在凋亡。2.IGF-1干预治疗后可以减少心肌细胞的凋亡,并且与剂量呈相关性。3.IGF-1可能通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达,抑制心肌细胞凋亡起到保护作用,为IGF-1临床治疗新生儿HIE后心肌损伤提供了更深层次的理论依据。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-12
  研究现状、成果  11
  研究目的、方法  11-12
1 对象和方法  12-17
  1.1 实验材料  12-13
    1.1.1 实验动物  12
    1.1.2 主要试剂与器材  12-13
      1.1.2.1 试剂  12
      1.1.2.2 主要仪器设备  12-13
  1.2 实验方法  13-16
    1.2.1 实验动物分组  13
    1.2.2 建立重度HIBD合并心肌损伤动物模型  13-14
    1.2.3 留取标本  14
    1.2.4 免疫组化法测定Bcl-2及Bax蛋白的表达  14-15
      1.2.4.1 免疫组化前的准备  14
      1.2.4.2 免疫组化的具体步骤  14-15
    1.2.5 TUNEL染色法标记凋亡具体步骤  15-16
    1.2.6 HE染色具体步骤  16
  1.3 统计分析  16-17
2 结果  17-19
  2.1 动物模型行为表现  17
  2.2 脑大体形态肉眼观  17
  2.3 HE染色  17
  2.4 正态性检验及方差分析  17-18
  2.5 Bcl-2、Bax在心肌组织中的表达  18
  2.6 TUNEL法检测原位心肌细胞凋亡  18-19
3 讨论  19-26
  3.1 缺氧缺血性脑损伤动物模型的建立  20
  3.2 缺氧缺血性脑损伤后的心肌损伤  20-21
  3.3 细胞凋亡及Bcl-2及Bax  21-22
  3.4 IGF-1与心肌细胞凋亡  22-26
结论  26-27
参考文献  27-31
发表论文情况说明  31-32
附录  32-35
综述  35-59
  综述参考文献  51-59
致谢  59

人IGF-1对HIBD新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

内容摘要

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