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CHFR基因CpG岛甲基化对Eca109细胞增殖凋亡的影响

作　者: 朱应超
导　师: 田辉
学　校: 山东大学
专　业: 外科学
关键词: CHFR 甲基化 Eca109细胞 增殖 凋亡
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


细胞周期检查点(cell cycle checkpoint)是保证细胞周期的演进中的关键过渡点,CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)是发现的第一个有丝分裂前期的检测点,是人类一个重要的抑癌基因。当有丝分裂应激时,CHFR表达能够延迟染色体的聚集,阻止细胞于有丝分裂前期。在正常组织中广泛表达,其结构和功能都十分保守,研究表明,在结肠癌、白血病、胃癌、肺癌等多种肿瘤组织中表达缺失,CpG岛的甲基化是导致CHFR表达缺失或沉默的重要机制。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)作为5-氮杂胞苷的衍生物,是一种特异性的DNA甲基转移酶抑制剂。DNA复制的过程中,5-Aza-CdR在复制叉上作用于甲基转移酶并使之失活；在DNA无甲基转移酶情况下复制时,使原来甲基化的基团发生去甲基化。近年来,DNA启动子甲基化作为抑癌基因失活的一条重要途径,在肿瘤发生发展中起着关键的作用,成为国内外研究的热点。食管癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的健康和生命,我国是食管癌的高发地区,以鳞癌为主；在西方国家,近年来食管腺癌发病率呈逐年上涨趋势。在食管癌中CHFR基因的相关研究却鲜有报道,本文通过研究CHFR基因CpG岛甲基化状态对食管癌Eca109细胞增殖凋亡的影响,来研究食管癌与CHFR基因关系,为探讨食管癌的发病机制寻找新的思路,为肿瘤治疗寻找新的靶点。目的：研究食管癌Eca109细胞中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态,以及此状态对细胞增殖、凋亡的影响。方法：1、食管癌Eca109细胞的培养并且分别用浓度为2、5、10μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理食管癌Eca109细胞。2、采用甲基化特异性PCR法检测未处理的食管癌Eca109细胞及不同浓度处理后CHRF基因CpG岛的甲基化状态。3、采用RT-PCR法检测未处理的食管癌Eca109细胞及不同浓度处理后CHFR基因mRNA的表达情况。4、MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖情况的影响。5、不同浓度5-Aza-CdR处理24h后,用流式细胞仪技术检测对Eca109细胞凋亡情况的影响。结果：1、食管癌Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,通过用不同浓度5-Aza-CdR处理食管癌Eca109细胞后CpG岛高甲基化状态可以发生部分去甲基化。2、RT-PCR检测发现Eca109细胞CHFR mRNA无表达,分别用2、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理后出现表达,相对表达量分别为：0.174±0.010,0.221±0.013,0.356±0.014,差异有统计学意义(P<0.05)。3、MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR处理Eca109细胞可抑制增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。在一定范围内Eca109细胞生长抑制率随处理药物浓度的增高及时间延长而作用越明显。4、流式细胞仪检测未处理及分别用2、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理24h后Eca109细胞的凋亡率分别为：1.83±0.41%,7.46±1.46%,16.27±1.61%,25.29±2.25%,差异有统计学意义(P<0.01),不同浓度5-Aza-CdR处理Eca109细胞可促进凋亡。结论：食管癌Eca109细胞CHFR基因CpG岛处于甲基化状态,并无mRNA表达,经不同浓度5-Aza-CdR处理后,CpG岛发生部分去甲基化,并出现CHFR mRNA表达；不同浓度处理后细胞增殖受到不同程度的抑制,并不同程度增加了细胞的凋亡率。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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