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去甲肾上腺素对VSMC增殖和细胞骨架蛋白、SM22α表达的影响

作　者: 刘斌
导　师: 吴开云
学　校: 苏州大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 去甲肾上腺素表型转化细胞骨架蛋白平滑肌 22α 细胞增殖
分类号: R543
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

研究目的探讨NE对血管平滑肌细胞表型转化、细胞增殖和骨架蛋白表达的影响以及它们之间的关系。实验方法:取健康SD大鼠腹主动脉作原代培养,用第2和6代的细胞做实验。实验分别将第2和6代的细胞分为血清培养和血清饥饿两个大组。每组又分成NE作用组和对照组,各组按检测方法不同可分为:①用于免疫细胞化学染色观察的接种在放有小玻片的24孔板内,细胞按5×104个/ml细胞密度每孔1ml,每组6孔;②用于RT-PCR检测的接种于50ml培养瓶中,每组2瓶,细胞按5×105个/ml细胞密度每瓶4ml。用含12%FCS的DMEM培养液,置37℃, 5% CO2培养箱中培养8小时后,细胞贴壁,换用0.5%FCS DMEM培养24h进行同步化处理(使所有细胞处于细胞周期的静止期),再用12%FCS的DMEM培养72小时后,实验组加入NE(NE 5×10-5mol/L)作用24小时后收细胞,标记细胞增殖的收细胞前24小时加入5-BrDU(终浓度为8×10-4mol/l)。用于免疫细胞化学检测的细胞用4%多聚甲醛固定,用于PCR检测的细胞保存在-20℃和4℃。其中血清饥饿组在用12%FCS的DMEM培养72小时后,换成无血清饥饿培养48小时,实验组加入NE(NE 5×10-5mol/L)作用,其它步骤与血清培养组相同。结果:一、NE对血管平滑肌细胞表型的影响SM22α是收缩型VSMC表型标志基因。正常VSMC表达SM22α,但在体外血清培养条件下,随着培养代数的增加,SM22α表达逐渐减少,NE有下调SM22α的表达,血清饥饿培养在第二代或第六代都可使SM22α的表达上调。二、NE对血管平滑肌细胞增殖的影响体外血清培养的VSMC随着培养代数的增加,标记的增殖细胞逐渐增多。在同一代细胞中,NE作用组与对照组相比较,增殖的细胞明显增多。而血清饥饿培养,其增殖的细胞减少。三、NE对血管平滑肌细胞骨架蛋白的影响正常VSMC表达SMα-actin、β-Tubulin和Desmin,在体外培养条件下,随着培养代数的增加SMα-actin、β-Tubulin和Desmin三种蛋白的表达均减少,其中β-Tubulin和Desmin减少十分显著,至第六代细胞未能检测出其表达。NE作用后这三种骨架蛋白的表达下调。结论:1. NE可以促VSMC增殖和表型从收缩型向合成型转化2. NE可下调SMα-actin、β-Tubulin和Desmin骨架蛋白的表达。3. VSMC骨架蛋白的表达变化与表型和增殖有密切相关,它们之间的因果关系有待进一步研究。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-9
材料和方法  9-17
结果  17-21
讨论  21-23
结论  23-24
参考文献  24-27
综述：神经体液因素对血管平滑肌细胞的影响  27-33
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  33-34
缩略词表  34-35
致谢  35-36
附图  36-37

去甲肾上腺素对VSMC增殖和细胞骨架蛋白、SM22α表达的影响

内容摘要

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