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可溶性表氧化物水解酶在冠状动脉粥样硬化病变中的表达及其意义

作　者: 霍雷军
导　师: 朱毅
学　校: 汕头大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 可溶性表氧化物水解酶动脉粥样硬化血管平滑肌细胞表型转化迁移
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是危害人类健康的常见病，其中由冠状动脉粥样硬化引起的心肌梗塞是AS中对人类构成威胁最大的疾病。血管平滑肌细胞（vascularsmooth muscle cell, VSMC）的增殖和迁移在AS病变形成中起重要作用，其表型转化是细胞增殖和迁移的先决条件。表氧-二十碳三烯酸（epoxyeicosatrienoic acids，EETs）是花生四烯酸经P450通路的代谢产物，被认为是内皮衍生性超极化因子，可使血管平滑肌细胞超极化，从而诱导冠状动脉舒张并降低黏附因子的表达。因此，EETs被认为是一种内源性预防高血压、动脉粥样硬化等血管病变的保护因子。可溶性表氧化物水解酶（solubleepoxide hydrolase，sEH）可将EETs水解转变为相应二羟基衍生物二羟-二十碳三烯酸，使EETs丧失其血管保护的生物活性。有研究报道，在动物实验中，sEH抑制剂可以减缓AS斑块的发展，但是sEH在人类AS发展过程中的表达变化及其机制尚不清楚。本课题旨在揭示sEH在人冠状动脉粥样硬化斑块中的表达及其机制，为动脉粥样硬化的治疗提供新的潜在性靶点，为sEH抑制剂临床应用的可行性提供理论基础。首先，我们收集2001-2010年汕头大学医学院病理学教研室法医病理尸检的人冠状动脉97例，其中有冠状动脉粥样硬化病变者61例，对照组36例。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色，根据冠脉管腔狭窄程度，将病变程度分成Ⅰ级、Ⅱ级、III级和Ⅳ级。通过sEH, SMα-actin和CD68等免疫组化和丽春红/维多利亚蓝（Ponceau/Victoria blue，P/VB）染色发现：在冠状动脉粥样硬化斑块的中膜层和增生内膜层sEH蛋白水平的表达较正常组增高。其中，增生内膜层中sEH表达主要集中在病变早期的Ⅰ级或Ⅱ级标本的向内膜迁移的VSMC，提示冠脉VSMC中sEH表达增高，可能在AS的早期病变中发挥一定作用。为了在细胞水平验证以上假说，我们以不同浓度的血小板源性生长因子（PDGF-BB）刺激培养的原代大鼠动脉平滑肌细胞，通过蛋白电泳免疫印迹分析发现PDGF-BB剂量依赖性增加sEH的表达。同时PDGF-BB下调VSMC分化型细胞表型转化标志物SMα-actin、SM22α和Cnn1的表达，该作用可被特异性sEH抑制剂TUPS部分抑制。采用sEH腺病毒（Ad-sEH）在VSMC中过表达sEH的结果发现：Ad-sEH转染VSMC 48小时后，sEH蛋白表达明显增加，同时伴随VSMC表型转化的标志物的改变。进一步，Transwell小室迁移实验的结果显示PDGF-BB处理及Ad-sEH感染的VSMC细胞迁移数目明显增多，而TUPS可部分抑制由PDGF-BB引起的细胞迁移。进一步在体动物试验中，我们通过导丝拉伤小鼠左颈总动脉建立颈动脉内膜损伤模型，并用sEH抑制剂TUPS干预sEH的生物学活性，观察内膜增生程度。内膜损伤术后2周，分离左、右颈总动脉，进行免疫荧光双重染色。结果发现在sEH+/+组的C57对照小鼠中，左颈动脉较右颈总动脉管壁增厚显著增加(16.64±1.24μm/11.58±0.67μm, P<0.001)，并有轻度的内膜增生；同时血管平滑肌层中sEH表达明显增高；而TUPS组和sEH-/-组动脉管壁增厚程度明显减轻（13.67±0.86μm, P=0.001；11.62±0.99μm, P<0.001）。本研究首次发现，在人冠状动脉粥样硬化斑块中的中膜层和增生内膜层VSMC中sEH蛋白水平的表达增高。而增生内膜层sEH表达主要集中在早期病变标本中，并源于迁移的VSMC。在PDGF-BB处理诱导的VSMC表型转化和细胞迁移过程中，sEH表达增加，而sEH的抑制剂可部分逆转PDGF-BB的作用。该结果在小鼠颈动脉内膜损伤引起的内膜增厚模型中得以验证。因而，本研究结果揭示了sEH参与了AS的发生、发展中动脉中膜平滑肌细胞的表型转化和向内膜的迁移，为阐明sEH在AS过程中的作用机制提供了理论基础，并为AS的早期临床治疗提供了潜在的治疗靶点。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
缩略词释义  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-32
结果  32-42
讨论  42-45
结论  45-46
参考文献  46-49
综述  49-61
  参考文献  56-61
致谢  61-62
个人简介  62

可溶性表氧化物水解酶在冠状动脉粥样硬化病变中的表达及其意义

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