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丝裂霉素纳米粉针剂的生物相容性与稳定性试验研究

作　者: 周红玲
导　师: 陈建海
学　校: 南方医科大学
专　业: 现代制剂
关键词: 丝裂霉素-聚氰基丙烯酸正丁酯-纳米粒微射流机生物相容性试验急性毒性试验溶血试验热原检查稳定性试验
分类号: R979.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本课题研究的注射用丝裂霉素C（MitomycinC，MMC）-聚氰基丙烯酸正丁酯（polybutylcyanoacrylate，PBCA）纳米粒（nanoparticle，NP）是一种用于治疗肝癌的新型被动靶向制剂。文献报道尚处于实验室研究阶段，未见其生产和应用于临床的报道。本研究是在优选出制备MMC-PBCA-NP的最佳工艺的基础上，对MMC-PBCA-NP的纯化、灭菌和冻干工艺进行探讨；并对制剂的生物相容性和稳定性进行了考察。本研究的主要研究方法、内容和结论包括以下几个方面：论文的第一部分：MMC-PBCA-NP的制备及纯化、灭菌和冻干工艺考察：在最佳制备工艺的条件下（投料量分别是：BCA：0.7％（v／v）；Dextran-70：3.5％（w／v）；MMC：0.04％（w／v）），采用乳化聚合法，在室温下避光磁力搅拌3h得到MMC-PBCA-NP初乳，再用微射流高压均质机将MMC-PBCA-NP初乳处理成粒径100nm左右的胶体溶液。微射流机的工作原理是：物料通过均质阀的孔隙时，在高压下经强剪切和冲击力的作用被瞬间超微破碎、乳化、分散。经过几次循环，可得到粒径大小在100nm左右的稳定的胶体溶液。透射电镜下观察纳米粒为光滑圆整的球形，纳米粒之间无粘连。光子相关光谱仪（Photon Correlation Spectroscopy，PCS）测得平均数均粒径为102±5.85nm。用紫外分光光度法测得包封率（EE）=85.27±1.50％，载药量（DL）=6.97±0.14％。然后对制剂的纯化、灭菌、干燥工艺进行了考察。试验结果表明：采用超速冷冻离心法，在4℃时以20000rpm的转速离心30min，洗涤离心三次能达到很好的纯化效果；采用⁶⁰C。射线灭菌，剂量为6kGy，辐照时间为7.5h可以达到较好的灭菌效果；以5％乳糖为冻干保护剂冷冻干燥样品可以得到光滑圆整的MMC-PBCA-NP冻干品。论文的第二部分：MMC-PBCA-NP的生物相容性试验研究，主要考察了样品的急性毒性、溶血性和是否含有热原。采用KM小鼠单剂量尾静脉注射（ⅳ）MMC-PBCA-NP、MMC和PBCA-NP，观察14d，记录其毒性反应情况及死亡数，计算制剂的LD₅₀。结果：MMC、MMC-PBCA-NP、PBCA-NP的LD₅₀分别是12.2mg.kg^-1、52.8mg.kg^-1、296.3mg.kg^-1；其95％可信区间分别是8.56～17.4mg.kg^-1、47.3～61.6 mg.kg^-1和234.2～374.9mg.kg^-1。结果表明MMC经高分子载体材料PBCA包裹成纳米粒后，毒性大大降低，而PBCA毒性很低，与有关文献报道一致。参照《新药研究的技术要求》，采用溶血试验考察了制剂的溶血性，结果表明MMC-PBCA-NP无溶血性。参照《中国药典》2005版附录XID进行了热原检查，结果表明用该方法制备的MMC-PBCA-NP不含热原。初步表明该试剂可供静脉注射用。论文第三部分：MMC-PBCA-NP的初步稳定性研究。采用加速试验，在温度40±2℃，湿度75±5％的条件下考察了三批MMC-PBCA-NP冻干品的稳定性，一共考察3个月，分别于0、1、2、3月取样。检测项目包括性状、鉴别、检查、含量测定，具体考察项目为外观色泽、含量、PH值、粒径、载药量、再分散性、再分散后的澄明度等。作为对照，在室温下考察MMC-PBCA-NP胶体溶液的稳定性三个月，考察项目同上。结果：在加速试验考察期内，MMC-PBCA-NP的外观色泽符合要求，含量没有降低，PH在规定范围内，粒径、载药量均无明显改变，再分散性良好，澄明度合乎要求。在室温稳定性试验考察期内，Dn逐渐增大，DL逐渐减小，胶体溶液颜色逐渐加深，并有絮凝现象出现。说明随着时间的推移，MMC-PBCA-NP胶体溶液不稳定。同时说明将MMC-PBCA-NP胶体溶液冷冻干燥后，可大大提高其稳定性。

全文目录

中文摘要  3-6
ABSTRACT  6-15
第一章绪论  15-24
  1.1 纳米粒载药系统的研究进展  16-21
    1.1.1 纳米粒载药系统的作用机制  16-17
    1.1.2 纳米粒载药系统的优点  17
    1.1.3 理想的纳米粒载药系统  17-18
    1.1.4 纳米粒载药系统的释药机理  18
    1.1.5 氰基丙烯酸烷酯纳米粒载药系统  18-20
    1.1.6 PACA-NP作为肝靶向给药系统  20
    1.1.7 PACA毒理学研究及降解  20-21
  1.2 MMC的研究进展  21-23
  1.3 本研究的目的  23
  1.4 主要工作内容  23
  1.5 创新性  23-24
第二章乳化聚合法结合微射流技术制备MMC-PBCA-NP粉针剂及其纯化和灭菌方法考察  24-38
  引言  24-25
  2.1 材料及仪器  25
  2.2 方法和结果  25-35
    2.2.1 MMC-PBCA-NP的制备  25-27
    2.2.2 MMC-PBCA-NP中MMC含量测定方法的建立  27-28
    2.2.3 纳米粒的载药量和包封率测定  28-29
    2.2.4 注射用MMC-PBCA纳米冻干剂的再分散  29
    2.2.5 粒径大小、多分散系数(Q)测定  29
    2.2.6 TEM电镜观测  29-32
    2.2.7 纯化  32-33
    2.2.8 MMC-PBCA-NP冷冻干燥工艺的考察  33-34
    2.2.9 灭菌  34-35
  2.3 讨论  35-37
  2.4 小结  37-38
第三章 MMC-PBCA-NP粉针剂的生物相容性考察  38-50
  前言  38
  第一节 MMC-PBCA-NP粉针剂的急性毒性试验  38-45
    3.1 材料与方法  38-39
      3.1.1 药物  38
      3.1.2 动物  38-39
      3.1.3 饲养条件  39
      3.1.4 剂量与分组  39
      3.1.5 给药容量  39
      3.1.6 评价指标及观察期  39
      3.1.7 统计方法  39
    3.2 结果  39-43
      3.2.1 MMC毒性反应情况  39-40
      3.2.2 MMC-PBCA-NP毒性反应情况  40-41
      3.2.3 PBCA-NP毒性反应情况  41-43
    3.3 讨论  43-44
    3.4 小结  44-45
  第二节溶血试验及热原检查  45-50
    3.1 材料与仪器  45
      3.1.1 药物  45
      3.1.2 动物  45
      3.1.3 仪器  45
    3.2 方法与结果  45-48
      3.2.1 溶血试验  45-46
      3.2.2 热原检查  46-48
    3.3 讨论  48-49
    3.4 小结  49-50
第四章 MMC-PBCA-NP粉针剂的初步稳定性考察  50-62
  4.1 仪器与试剂  50-51
  4.2 试验方法  51
  4.3 试验结果  51-61
    4.3.1 加速试验结果  51-58
    4.3.2 常温试验结果  58-61
  4.4 讨论  61
  4.5 小结  61-62
全文总结  62-64
参考文献  64-70
附录  70-71
硕士期间发表的文章  71-72
致谢  72-73

丝裂霉素纳米粉针剂的生物相容性与稳定性试验研究

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