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NYD-SP15基因的原核表达、抗体的制备以及细胞发育相关基因LIMS E的克隆分析

作　者: 程立波
导　师: 刘庆淮
学　校: 南京医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 原核表达质粒 NYD-SP15 多克隆抗体 Lims基因基因表达基因剪切
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：第一部分：通过构建与增生性病变相关基因NYD-SP15的原核表达质粒，体外诱导NYD-SP15蛋白的表达，免疫小鼠获得抗体，并把获得的多克隆抗体运用于增生性玻璃体视网膜病变的免疫组化研究。第二部分：研究Lims基因在PVR发生过程中RPE细胞发育中的作用。方法：第一部分：应用PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框，构建PET28a-NYD-SP15载体，再将其转入表达菌株，IPT6诱导表达，Ni柱纯化，免疫BALB／C小鼠，Western-blot法检测纯化的蛋白和抗体，取视网膜增殖膜临床标本，抗体行免疫组化染色。第二部分：应用巢式RT—PCR，以小鼠cDNA为模板，扩增Lims基因不同剪切子，构入PinPointTM Xa-1P质粒，测序鉴定。结果：第一部分：成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒，并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株，表达的His标签融合蛋白，分子量为58KD左右，经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体。经Western-blot法分析，抗体为NYD-SP15特异性抗体。免疫组化染色显示，NYD-SP15基因表达于视网膜色素上皮细胞的胞浆，呈现棕色染色。第二部分：测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E，该变异剪切体编码区为1164 bp，编码387个氨基酸。结论：第一部分：构建的NYD-SP15基因的原核表达载体，体外高效表达蛋白，免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体，在视网膜增殖膜的标本中，存在着NYD-SP15基因的表达，这些将为眼部增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的研究及治疗奠定坚实的基础。第二部分：比较基因组学分析显示，成功地克隆了一新的小鼠Lims基因剪切子Lims E，为进一步研究Lims基因可能在RPE细胞发育中的功能打下了基础。

全文目录

一、缩略语  4-5
二、中文摘要  5-7
三、英文摘要  7-10
四、引言  10-12
五、正文  12-46
  第一部分:NYD-SP15基因的原核表达、抗体制备  12-31
    (一) 材料与方法  13-17
    (二) 结果  17-24
    (三) 讨论  24-27
    (四) 小结  27-28
    (五) 参考文献  28-31
  第二部分:细胞发育相关基因LIMS E的克隆和初步分析  31-46
    (一) 材料与方法  32-35
    (二) 结果  35-41
    (三) 讨论  41-43
    (四) 小结  43-44
    (五) 参考文献  44-46
六、致谢  46-47
七、综述  47-54
八、综述参考文献  54-61

NYD-SP15基因的原核表达、抗体的制备以及细胞发育相关基因LIMS E的克隆分析

内容摘要

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