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一种新的HSP90和HSP70伴侣蛋白TTC36在人视网膜色素上皮细胞中的定位和功能研究以及基因LimsA的克隆分析

作　者: 陈曦
导　师: 刘庆淮
学　校: 南京医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 热休克蛋白90 热休克蛋白70 TTC36 ARPE-19 增生性玻璃体视网膜病变 Lims基因基因表达基因剪切
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:研究热休克蛋白HSP90和HSP70的伴侣蛋白TTC36在人视网膜色素上皮(RPE)细胞ARPE-19中的亚细胞定位和功能,以进一步探讨TTC36和HSP90、HSP70在RPE细胞的增殖和凋亡以及RPE细胞增殖相关病变如增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生和发展过程中的作用机制。方法:采用基因重组技术构建TTC36红色荧光表达载体,用LipofectamineTM 2000将plp-RFP-TTC36和plp-GFP-HSP90/plp-GFP-HSP70共转染RPE细胞,激光共聚焦显微镜观察TTC36和HSP90/70在ARPE-19细胞中的共定位。流式细胞仪检测转染TTC36的ARPE-19细胞的细胞周期。实时荧光定量PCR检测HSP90抑制剂17-AAG处理的ARPE-19细胞中TTC36、HSP90和HSP70mRNA的表达水平。结果:经PCR和测序分析鉴定,成功地构建了TTC36红色荧光表达载体plp-RFP-TTC36;TTC36和HSP90、TTC36和HSP70均共定位于ARPE-19细胞的胞浆,且TTC36瞬时转染对于促进ARPE-19细胞的增殖有一定作用。17-AAG处理ARPE-19细胞后导致TTC36 mRNA表达下降。结论:在RPE细胞中TTC36和热休克蛋白HSP90、HSP70能够相互作用,因此TTC36和HSP90、HSP70可能参与RPE细胞的增殖和凋亡,可能与一些RPE细胞增殖凋亡相关病变如增生性玻璃体视网膜病变的发生发展有关。本研究为TTC36和热休克蛋白HSP90、HSP70的功能研究莫定了基础,并可能为研究RPE细胞增殖和凋亡相关眼病的发病机制和治疗开辟了一条新的途径。目的:克隆与分析大鼠不同剪切的Lims基因。方法:应用巢式RT-PCR,以SD大鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定。结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims A,该变异剪切体编码区为1014bp,编码338个氨基酸。结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的大鼠Lims基因剪切子Lims A,为进一步探索Lims基因在增生性玻璃体视网膜病变中的功能奠定基础。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
第一部分：一种新的 HSP90 和 HSP70 伴侣蛋白 TTC36 在人视网膜色素上皮细胞中的定位和功能研究  9-33
  前言  9-12
  材料与方法  12-18
  结果  18-20
  分析与讨论  20-23
  小结  23-24
  参考文献  24-28
  附图  28-33
第二部分：Lims A 一个新的LIM 同源域基因的克隆和初步分析  33-47
  前言  33-34
  材料与方法  34-36
  结果  36-38
  分析与讨论  38-40
  小结  40-41
  参考文献  41-43
  附图  43-47
文献综述  47-57
  综述参考文献  53-57
附录  57-58
攻读学位期间发表文章情况  58-59
致谢  59

一种新的HSP90和HSP70伴侣蛋白TTC36在人视网膜色素上皮细胞中的定位和功能研究以及基因LimsA的克隆分析

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