学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

禽呼肠孤病毒S3、S4基因的克隆与序列分析

作　者: 李建云
导　师: 关平原；申之义；张七斤
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 禽呼肠孤病毒 S3、S4基因克隆序列分析
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 99次
引　用: 3次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本试验提取禽呼肠孤病毒内蒙古、天津地区分离株(B-98、C-98、G-98、T-98株)病毒总RNA。参考GenBank中禽呼肠孤病毒S3、S4基因序列设计2对引物。应用RT-PCR技术特异性地扩增病毒的S3、S4基因。将纯化的目的DNA与PMD19-T载体连接,转化到DH5α感受态细胞中,应用蓝白斑法筛选阳性重组质粒,然后用PCR法鉴定重组质粒,将鉴定的阳性重组菌送生物工程公司测定S3、S4基因序列,应用计算机软件将测定序列与参考序列进行比较。结果表明测定的S3基因节段长1202bp,均包含完整的开放性阅读框(Open Reading Frame,ORF),位于31～1134 bp;S4基因节段长1109bp,包含完整的开放性阅读框(ORF),位于2～1105 bp。禽呼肠孤病毒B-98、C-98、G-98和T-98的S3基因序列已成功登录GenBank,登录号分别为EF030498、EF030496、EF030497、EF030499。四个分离株的S3基因与禽呼肠孤病毒S1133、176和鸡源番鸭呼肠孤病毒YJL的同源性很高在99.2%～100%之间;与禽呼肠孤病毒138的同源性较高在87.0%～87.3%之间;与番鸭呼肠孤病毒S14和89026的同源性较低在60.0%～64.1%之间;与哺乳动物呼肠孤病毒3和纳尔逊海湾病毒的同源性很低分别为3.8%和19.2%。四个分离株的S4基因与禽呼肠孤病毒S1133、176和鸡源番鸭呼肠孤病毒YJL的同源性很高在98.8%～99.6%之间;与禽呼肠孤病毒138和番鸭呼肠孤病毒S14和89026的同源性较高在76.4%～81.2%之间;与哺乳动物呼肠孤病毒3和纳尔逊海湾病毒的同源性很低分别为6.5%～6.6%和53.9%～56.2%。S3和S4基因系统发生树分析表明,均与禽呼肠孤病毒S1133、176和鸡源番鸭呼肠孤病毒YJL的遗传进化关系最近,分属同一进化分支。天津、内蒙古分离株的σB蛋白和σNS蛋白结构分析表明,它们均为亲水蛋白,等电点在6.27～7.10之间。天津、内蒙古分离株σB蛋白和σNS蛋白抗原位点与禽呼肠孤病毒S1133、176和鸡源番鸭呼肠孤病毒YJL相同。综上所述,禽呼肠孤病毒内蒙古、天津地区分离株S3和S4基因的抗原位点分析结果与同源性、系统发生树结果相互一致,与禽呼肠孤病毒S1133、176和鸡源番鸭呼肠孤病毒YJL的同源性最高,分属同一进化分支,且抗原位点相同。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
1 引言  8-21
  1.1 禽呼肠孤病毒感染概述  8
  1.2 病原学  8-15
    1.2.1 分类、形态与特性  8-9
    1.2.2 化学组成  9
    1.2.3 抗原性  9
    1.2.4 培养特性  9-10
    1.2.5 致病性  10
    1.2.6 抵抗力  10-11
    1.2.8 病毒基因组及编码蛋白质的功能  11-15
  1.3 流行病学  15
    1.3.1 易感动物  15
    1.3.2 传染源  15
    1.3.3 传播途径  15
  1.4 临床症状  15-16
  1.5 病理变化  16
  1.6 诊断  16-18
  1.7 防治  18-21
  1.8 本论文研究依据及意义  21
2 材料与方法  21-27
  2.1 材料  21-23
    2.1.1 试验用病毒株  21
    2.1.2 参考毒株序列  21-22
    2.1.3 菌株及质粒  22
    2.1.4 主要试剂以及试剂盒  22
    2.1.5 试验所用溶液及其配制  22-23
    2.1.6 主要仪器设备  23
  2.2 方法  23-27
    2.2.1 引物的设计与合成  23
    2.2.2 病毒 RNA 的提取  23-24
    2.2.3 病毒目的基因的一步法 RT-PCR 扩增  24
    2.2.4 病毒目的基因的克隆  24-27
    2.2.5 质粒DNA 测序  27
    2.2.6 基因序列拼接  27
    2.2.7 序列比较分析  27
3 结果  27-42
  3.1 病毒目的基因的一步法 RT-PCR 扩增结果  27-28
    3.1.1 S3 基因的一步法 RT-PCR 扩增结果  27-28
    3.1.2 S4 基因的一步法 RT-PCR 扩增结果  28
  3.2 重组质粒的 PCR 鉴定结果  28-29
    3.2.1 S3 基因的重组质粒的PCR 鉴定  28
    3.2.2 S4 基因的重组质粒的PCR 鉴定  28-29
  3.3 序列的测定结果  29-34
    3.3.1 S3 基因序列测定结果  29-32
    3.3.2 S4 基因序列测定结果  32-34
  3.4 序列分析结果  34-42
    3.4.1 S3 基因序列分析  34-38
    3.4.2 S4 基因序列分析  38-42
4 讨论  42-45
5 结论  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-55
附录  55-67
作者简介  67

禽呼肠孤病毒S3、S4基因的克隆与序列分析

内容摘要

全文目录

相似论文