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两株不同来源新城疫病毒人工感染SPF鸡组织嗜性比较的研究

作　者: 葛鑫
导　师: 冯新畅
学　校: 东北农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 新城疫病毒 SPF鸡 组织嗜性
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 86次
引　用: 1次
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内容摘要


新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）可以在鸡群中引发以呼吸道、神经系统或是肠道病变为主要症状，具有高度传染性的疾病。以前普遍认为水禽对NDV不致病，即使带毒也不表现出临床症状。但自1997年来，在我国很多地区相继发生由NDV引起的鹅的临诊感染，特别是在华南和华东地区已形成流行趋势。感染鹅群表现较高的发病率和死亡率，造成巨大的经济损失。本文通过比较鹅源NDV与鸡源NDV对SPF鸡组织嗜性的差异，为证明鹅源NDV与鸡源NDV的不同提供一个佐证。鹅源NDV HLJCF04-1在鸡胚成纤维细胞（CEF）上进行蚀斑纯化后，随机选择5个蚀斑，扩增F基因1.5kb片断进行PCR产物直接测序，选择序列变异最小蚀斑，接种CEF细胞获得的病毒液命名为Go／HLJCF04／05（以下简称HLJCF4）。测定其最小致死剂量鸡胚平均死亡时间（MDT）为59.6h和F蛋白氨基酸裂解位点为“RRQKRF”均符合强毒特征。以103EID50／0.1mL鹅源NDVHLJCF04人工感染15日龄SPF鸡，同时建立相同感染剂量组的鸡源标准强毒株F48E9阳性对照和PBS阴性对照。在感染后48h、96h和120h，观察鸡群发病情况，随机取3只鸡剖检检查病理变化；同时取脑、哈德氏腺、气管、肺、盲肠扁桃体、法氏囊（为叙述方便，将脑、哈德氏腺、气管、肺、盲肠扁桃体和法氏囊按顺序称为组织器官）。应用鸡胚半数感染量(EID50)和荧光定量（real time）RT-PCR两种方法动态检测HLJCF04和F48E9株在组织器官中的病毒滴度。HLJCF04和F48E9感染组的SPF鸡在感染24h内发病，HLJCF04感染组在感染后90h出现死亡鸡，感染后144h全部死亡；F48E9感染组在感染后86h出现死亡鸡，在感染后120h全部死亡。从发病率、致死率与病程来看，HLJCF04与F48E9感染组的SPF鸡均为100％的发病率、100％的致死率。表明HLJCF04和F48E9株相似，对鸡有高度的致病性。而F48E9感染组SPF鸡平均死亡时间较HLJCF04组短。提示HLJCF04株的毒力比F48E9弱。在10日龄SPF鸡胚上对HLJCF04和F48E9感染后48h、96h获得的组织器官（3只鸡取相同的量混合）进行病毒分离，除HLJCF04感染组在感染后48h的病鸡脑中没有分离到病毒外，其它组织器官中均分离到病毒。通过鸡胚半数感染量和荧光定量RT-PCR两种检测方法分别对HLJCF04和F48E9感染后48h、96h、120h获得的组织器官（3只鸡取相同的量混合）中的病毒滴度进行测定。两种检测方法得到的结果基本上是一致的：HLJCF04和F48E9株的病毒滴度随感染时间的延长而增加，病毒的最高滴度大体出现在感染后120h。鸡胚半数感染量检测结果：HLJCF04／120h／组织器官中病毒滴度分别为106.0、105.7、108.4、109.3、1010.7、107.2EID50／0.1g；F48E9／120h／组织器官中病毒滴度分别为105.9、105.3、106.3、107.5、108.4和107.7EID50／0.1g。荧光定量RT-PCR检测结果：HLJCF04／120h组织器官中病毒滴度分别为1.18E+05、3.00E+04、3.68E+08、4.88E+08、1.76E+09、4.14E+05拷贝数／0.1g；F48E9／120h／组织器官中病毒含量分别为1.15E+05、8.04E+03、2.12E+05、1.71E+08、2.22E+08、6.36E+06拷贝数／0.1g。总体上看，HLJCF04株在肺、气管、盲肠扁桃体和法氏囊中的病毒滴度比F48E9株高，在脑和哈德氏腺中比F48E9株低。通过在组织器官中的病毒株间滴度差异，反映：与鸡源NDVF48E9株是一株嗜神经型的强毒株相比，鹅源NDVHLJCF04是一株嗜内脏型且能够引起鸡出现神经症状的强毒株。103EID50 HLJCF04株通过点眼途径对18日龄SPF鸭进行人工感染实验，感染后鸭无发病率和死亡率。通过荧光定量方法对获得的脑、气管、肺和盲肠扁桃体进行病毒滴度的动态测定，在组织器官中未检测到病毒。表明此毒株对鸭不致病。

全文目录


中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
1 引言  12-22
  1.1 新城疫病毒研究概况  12-19
    1.1.1 新城疫病毒的一般生物学特性  13-15
    1.1.2 新城疫病毒的基因组特点  15-16
    1.1.3 新城疫病毒致病机制研究进展  16-19
  1.2 我国鹅源新城疫的流行情况  19-21
  1.3 研究的目的和意义  21-22
2 材料与方法  22-30
  2.1 实验材料  22
    2.1.1 病毒及分子生物学相关材料  22
    2.1.2 生物制剂与主要试剂  22
    2.1.3 实验仪器  22
    2.1.4 实验动物  22
  2.2 实验方法  22-30
    2.2.1 HLJCF04株的蚀斑纯化  22-24
    2.2.2 HLJCFD4株的部分生物学特性  24
    2.2.3 不同来源NDV人工感染SPF鸡  24
    2.2.4 不同来源NDV的分离鉴定  24-25
    2.2.5 鸡胚半数感染量方法检测不同来源NDV在组织器官中的动态分布  25
    2.2.6 荧光定量RT-PCR方法检测不同来源NDV在组织器官中的动态分布  25-29
    2.2.7 荧光定量RT-PCR方法检测鹅源NDV在SPF鸭组织器管中的动态分布  29-30
3 实验结果  30-41
  3.1 HLJCF04株的纯化  30
  3.2 HLJCF04株的部分生物学特性  30-31
    3.2.1 HLJCF04株血凝谱  30
    3.2.2 HLJCF04株鸡胚半数感染量及最小致死量接种鸡胚平均死亡时间  30-31
  3.3 不同来源NDV人工感染SPF鸡模型的建立  31-32
    3.3.1 临床症状  31
    3.3.2 病理变化  31-32
  3.4 不同来源NDV的分离鉴定  32
  3.5 鸡胚半数感染量方法检测不同来源NDV在组织器官中的动态分布  32-35
  3.6 荧光定量RT-PCR方法检测不同来源NDV在组织器官中的动态分布  35-39
    3.6.1 荧光定量RT-PCR方法标准品的构建  35-36
    3.6.2 荧光定量RT-PCR方法的建立  36-37
    3.6.3 荧光定量RT-PCR方法检测不同来源NDV在组织器官中的动态分布  37-39
  3.7 荧光定量RT-PCR方法检测鹅源NDV在SPF鸭组织器管中的动态分布  39-41
4 讨论  41-45
  4.1 HLJCF04株的纯化  41
  4.2 HLJCF04株的部分生物学特性  41
  4.3 不同来源NDV人工感染SPF鸡模型的建立  41-42
  4.4 荧光定量RT-PCR方法和病毒分离方法  42-43
  4.5 不同来源NDV的分离鉴定  43
  4.6 定量检测不同来源的新城疫病毒在组织器官中的动态分布  43-44
  4.7 鹅源NDV对SPF鸡与SPF鸭的致病性  44-45
5 结论  45-46
致谢  46-47
参考文献  47-52
附录  52-54
攻读硕士研究生期间发表的论文  54

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鸡
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