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豆粕发酵制备抗氧化肽的研究

作　者: 刘明
导　师: 吴永沛；倪辉
学　校: 集美大学
专　业: 食品科学
关键词: 大豆抗氧化活性肽 菌种筛选 固态发酵 液态发酵 响应面法 分离纯化 氨基酸分析 总抗氧化活性
分类号: TQ464.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


大豆抗氧化活性肽具有清除羟基自由基、终止单线态氧的生成、螯合重金属离子、捕捉体内自由基等抗氧化功效。目前国内外相关研究大多利用商品蛋白酶水解大豆制备抗氧化肽,存在得率低、成本高等问题。本论文对发酵法制备大豆抗氧化活性肽进行了较深入的研究,为改良大豆抗氧化肽的生产方法及开发大豆抗氧化肽产品提供了实验依据。本论文从实验室保存的12株蛋白酶产生菌中筛选出大豆抗氧化活性肽高产菌株Jb009,该菌株蛋白酶活力达到2.28u/mL。采用单因素试验和二因素二次回归通用旋转组合设计分析优化固态发酵大豆抗氧化活性肽工艺,得到最佳工艺条件为:培养基中豆粕与麸皮比例为4:1,水分含量为66.7%,起始pH为8.49,接种量为25.0%,种龄48h,发酵温度为33.7℃,发酵时间为36h。在此条件下反应产物的总抗氧化活性理论值可达557.72U/g豆粕。应用单因素试验、析因试验、最速上升试验和二因素二次回归通用旋转组合设计分析,优化获得最佳液态发酵大豆抗氧化活性肽工艺条件为:培养基料液比1:25,pH值为7.39,接种量为5.19%,种龄36h,发酵温度37℃,发酵时间36h。在此条件下反应产物的总抗氧化活性理论值可达795.75U/g豆粕。液态发酵和固态发酵两种方式比较液态方式略高,选取液态发酵为最佳发酵方式。测定大豆抗氧化肽的抗氧化活性,利用T-AOC方法测定总抗氧化活性;水杨酸法测定清除羟基自由基活性;邻苯三酚法测定清除超氧阴离子活性;卵磷脂法测定抑制脂质体过氧化能力;POV值法测定抗油脂自氧化能力;亚油酸自氧化法测定清除烷基过氧化物活性;DPPH法测定清除DPPH自由基活性;脱氧核糖法测定对DNA氧化损伤的保护能力。得到大豆抗氧化肽的总抗氧化活性为50.07U,对羟基自由基的清除率达到85.68%;抑制邻苯三酚自氧化能力达到23.61U/mL;抑制脂质体过氧化能力为34.58%;对油脂过氧化抑制抑制率为30%;对烷基自由基的清除能力达到72.27%;对DPPH自由基清除率为35%;对DNA氧化损伤的保护能力达38.77%。大豆抗氧化活性肽发酵液经10kDa膜超滤后冷冻干燥,溶解,经DEAE-Sepharose离子交换柱,Sephadex G-25 Medium凝胶层析柱分离纯化,并用Tricine-SDS-Page测定纯度和分子量范围,得到分子量在6kDa和8kDa纯度较高的两个组分:PtIV-1和PtⅦ-2。氨基酸分析发现:PtIV-1中,天冬氨酸含量达到27.85%,比豆粕和超滤液中含量分别增长了207.5%和89.46%,谷氨酸含量达到30.41%,也分别增长了101.79%和28.80%;而PtⅦ-2中,含羟基的中性氨基酸苏氨酸含量达到9.41%,比豆粕和超滤液中含量分别增长了131.77%和141.28%,丝氨酸含量达到10.41%,分别增长了100.19%和103.32%。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章 绪论  10-21
  1.1 大豆活性多肽功能的研究进展  10-15
  1.2 大豆抗氧化活性肽研究进展  15-19
  1.3 立题依据与意义  19-20
  1.4 论文主要内容  20-21
第二章 发酵法生产大豆抗氧化活性肽菌种筛选  21-28
  2.0 引言  21
  2.1 材料与方法  21-25
  2.2 结果与分析  25-27
  2.3 本章小结  27-28
第三章 固态发酵大豆抗氧化活性肽条件的优化  28-38
  3.0 引言  28
  3.1 材料与方法  28-30
  3.2 结果与分析  30-36
  3.3 本章小结  36-38
第四章 液态发酵大豆抗氧化活性肽条件的优化  38-50
  4.0 引言  38
  4.1 材料与方法  38-40
  4.2 结果与分析  40-49
  4.3 本章小结  49-50
第五章 大豆抗氧化肽的活性分析  50-65
  5.0 引言  50
  5.1 材料与方法  50-58
  5.2 结果与分析  58-63
  5.3 本章小结  63-65
第六章大豆抗氧化活性肽的分离纯化  65-75
  6.0 引言  65
  6.1 材料与方法  65-70
  6.2 结果与分析  70-74
  6.3 本章小结  74-75
第七章 结论  75-77
  7.1 研究结论  75-76
  7.2 问题与展望  76-77
致谢  77-78
参考文献  78-84
在学期间发表的学术论文目录  84

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 生物制品药物的生产 > 氨基酸、肽、蛋白质
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