学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

HTRA1启动子区域的多态性与年龄相关性黄斑变性的关联性

作　者: 曾杰西
导　师: 唐罗生；张康
学　校: 中南大学
专　业: 眼科学
关键词: 年龄相关性黄斑变性 HTRA1 SNP 克隆蛋白表达
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 89次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：探讨染色体10q26上HTRA1启动子区域单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)与年龄相关性黄斑变性(Age-related Macular Degeneration，AMD)的关联性以及HTRA1(HighTemperature Requirement Factor A1、)在人眼各层次中的表达。方法：1．以犹他州高加索人群为研究对象，采集各型AMD患者和对照组人群血样并提取DNA。2．以SNP rs11200638为中心选取染色体10q26上HTRA1基因内或HTRA1上游的9个标签SNP位点，通过单核苷酸引物延伸法对犹他州高加索人群中的各型AMD患者和种族、年龄相匹配的正常对照组人群进行基因分型，并用卡方检验检测其与AMD的关联性。3．从健康成年人血样中提取RNA，通过RT-PCR克隆HTRA1基因的编码区，在原核中进行HTRA1重组蛋白的表达和纯化，并用Western Blot检测HTRA1重组蛋白的抗原性。4．用兔抗人HTRA1多克隆抗体对AMD患者和正常人眼球冰冻切片进行免疫组化反应，检测HTRA1在人眼各层次中的表达。结果：1．SNP rs11200638与晚期AMD的2种类型，GA和湿性AMD，具有几乎一致的显著关联性，其与软性玻璃膜疣也具有一定的关联性，但比晚期AMD低。SNP rs10490924与各型AMD具有显著的关联性，但不及rs11200638显著。2．以pET32a为载体构建的重组质粒，在BL21细菌中经IPTG诱导后，获得高效的HTRA1重组蛋白表达。通过Ni-NTA蛋白纯化柱纯化，获得高纯度并具有抗原性的重组HTRA1蛋白。3．HTRA1在玻璃膜疣和新生血管组织上均有表达。结论：1．HTRA1启动因子内的rs11200638除了与湿性AMD有关联外与GA和软性玻璃膜疣均有显著的关联性。HTRA1很可能是晚期AMD，包括GA和湿性AMD的主要危险因子，对软性玻璃膜疣的形成亦有一定的影响。2．由于His.Tag与Ni-NTA蛋白纯化柱的特异性结合，我们获得了高纯度的HTRA1重组蛋白。通过Western Blot对纯化、透析后的重组蛋白抗原性进行检测，发现该蛋白具有很好的抗原性。因此，只需通过放大培养即可获得大量高纯度并具有天然抗原性的HTRA1重组蛋白，以用于动物模型的体内功能研究和抗体的制备。3．HTRA1可能在玻璃膜疣和新生血管的形成过程中起到了重要的作用，玻璃膜疣和新生血管形成可能并非是完全独立的2个阶段。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
缩略词  10-11
论文正文  11-49
  前言  11-13
  第一章 AMD 患者的筛查及样本的收集  13-20
    1.1 材料与方法  13-15
    1.2 结果  15-17
    1.3 讨论  17-20
  第二章染色体 10q26上9个 SNP 在犹他人群的基因分型  20-32
    2.1 材料与方法  20-24
    2.2 结果  24-29
    2.3 讨论  29-32
  第三章 HTRA1 的克隆与蛋白的表达  32-44
    3.1 材料与方法  32-38
    3.2 结果  38-40
    3.3 讨论  40-44
  第四章 HTRA1 在人眼的表达  44-49
    4.1 材料与方法  44-45
    4.2 结果  45-47
    4.3 讨论  47-49
结论  49-50
参考文献  50-53
综述  53-65
致谢  65-66
攻读学位期间主要的研究成果  66

HTRA1启动子区域的多态性与年龄相关性黄斑变性的关联性

内容摘要

全文目录

相似论文