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葡萄顶枯病在中国的发现与鉴定

作　者: 李茹一
导　师: 李华
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 葡萄与葡萄酒学
关键词: 葡萄顶枯病 PCR 分子生物学鉴定
分类号: S436.631
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究于2004年起从陕西杨陵地区张家港的葡萄园采集病株,为了证明国内是否存在葡萄顶枯病,我们对采集的病株进行了分离培养,培养出的菌株经过培养性状观察初步筛选,其后利用多种分子生物学方法对其进行鉴定。试验研究结果如下:1.经过多个季节的采集病枝结果对照,在新梢生长期病害症状最容易观察。2.在对菌株进行分子生物学鉴定的过程中,利用了多种分子生物学鉴定的方法:利用特定引物PCR方法对疑似菌株进行初步鉴定,结果发现其中一个疑似菌株具有与目标菌株相似的部分序列;利用PCR-RFLP方法酶切鉴定疑似菌株的具体属种,由于缺乏多种标准性对照菌株,对照结果并不能确定所属;最终使用DNA测序,在Genebank中将测得的数据进行比对,分析,确定为Eutypella vitis。3.Eutypella vitis为国外已鉴定的葡萄顶枯病的致病病原菌。可以造成与葡萄顶枯病相同的症状,但是症状要比国外的主要发病菌Eutypa lata轻。由此我们推断,杨陵葡萄产区的葡萄顶枯病是由Eutypella vitis造成的,至于在其他产区是否存在此致病菌以及是否存在多种病原菌的互作,还需要进一步的研究。本试验在国内首次发现了葡萄顶枯病病害,并为以后的分离和鉴定奠定了一定的基础。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
第一章文献综述  8-19
  1.1 葡萄顶枯病  8-9
    1.1.1 葡萄顶枯病的起源和分布  8
    1.1.2 葡萄顶枯病的症状  8-9
  1.2 葡萄顶枯病病原菌  9-16
    1.2.1 病原菌的生物学特征  9
    1.2.2 病原菌的鉴定  9-15
    1.2.3 葡萄顶枯病的致病机理  15
    1.2.4 寄主范围  15
    1.2.5 菌种的保藏  15
    1.2.6 致病性检验(回接检验)  15-16
  1.3 葡萄顶枯病的防治  16-17
    1.3.1 栽培防治  16-17
    1.3.2 化学防治  17
  1.4 研究的目的和意义  17-19
第二章材料与方法  19-24
  2.1 材料  19
    2.1.1 试验对象  19
    2.1.2 培养基  19
    2.1.3 试剂  19
    2.1.4 仪器和设备  19
  2.2 方法  19-24
    2.2.1 标本的采集及病情分析  19
    2.2.2 病原菌的分离培养以及初步形态学筛选  19-20
    2.2.3 DNA 的提取  20
    2.2.4 特异引物PCR 鉴定  20-22
    2.2.5 PCR-RFLP（限制性酶切片段长度多态性分析）  22
    2.2.6 疑似菌株核苷酸序列测定  22
    2.2.7 致病性检测  22-24
第三章结果与分析  24-32
  3.1 典型样本症状  24-25
  3.2 菌丝体初步筛选  25
  3.3 疑似菌株PCR 鉴定  25-27
  3.4 木质部直接 PCR 鉴定  27
  3.5 PCR-RFLP（限制性酶切片段长度多态性分析）  27-28
  3.6 疑似菌株核苷酸序列测定  28-31
    3.6.1 疑似菌株 ITS 区 PCR 扩增  28-29
    3.6.2 菌株 ITS 区测序结果及对比结果  29-31
  3.7 致病性检测  31-32
第四章讨论  32-34
  4.1 样本症状的观察与确定  32
  4.2 菌株的分离与鉴定方法  32-34
第五章结论  34-35
参考文献  35-41
附录  41-42
致谢  42-43
作者简介  43

葡萄顶枯病在中国的发现与鉴定

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