学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

小鼠TNF-α诱导蛋白TNFAIP1与p50及PCNA相互作用

作　者: 胡小晓
导　师: 张健；周建林
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人PDIP1 小鼠TNFAIP1基因肿瘤坏死因子α DNA聚合酶δ亚单位(p50) 增殖细胞核抗原(PCNA) 免疫共沉淀 pull-down实验
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 45次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

小鼠TNFAIP1蛋白是第一个被发现的肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导蛋白，又称为B12基因，其功能尚未见报导。我们通过生物信息学分析发现：小鼠TNFAIP1基因与人类PDIP1基因高度同源。这暗示着小鼠TNFAIP1基因可能具有类似的功能，如与DNA聚合酶δ亚单位(p50) 和增殖细胞核抗原(PCNA)相互作用。为了研究TNFAIP1的功能，我们从小鼠肝脏组织分离了小鼠TNFAIP1、 p50和PCNA三个基因，以正确的读码框连入一系列真核和原核表达载体中。将这些重组质粒转化E.coli．DH5α，挑阳性菌落酶切鉴定后送去测序。首先将两组重组质粒TNFAIP1和p50，TNFAIP1和PCNA分别对HeLa细胞瞬时转染后进行免疫共沉淀实验，Western blot结果显示出每组基因编码的蛋白质能够发生相互作用。然后在原核细胞E.coli．的DE3感受态细胞中表达出含不同接头的重组蛋白(TNFAIP1的GST融合蛋白、p50和PCNA的His-tag融合蛋白)，提纯这三种融合蛋白，通过pull-down实验进一步证实了小鼠TNFAIP1和p50及PCNA的直接作用。小鼠TNFAIP1基因用NCBI网站的软件分析到位于染色体110q25 cM的位置，其间距为12． 9kb，包含七个外显子。该蛋白的N端具有一个BTB／POZ结合域和C端具有一个PCNA的保守结合域(QTKV-EFP)。有研究表明，这个BTB／POZ结合域和PCNA的结合域都在进化中具有保守性。我的一系列实验证明了小鼠TNFAIPI蛋白与DNA聚合酶6的亚单位p50，同时与PCNA都能发生直接的相互作用。由此推测小鼠TNFAIPI蛋白可能参与DNA复制过程，这能为深入研究人类TNFA工Pl基因的功能提供参考。

全文目录

英文缩写表  3-4
主要仪器设备  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-38
结果  38-46
  1 计算机序列分析  38-40
  2 蛋白质表达及提纯  40-41
  3 荧光定位  41-42
  4 抗体的制备  42-43
  5 pull-down和免疫共沉淀  43-46
讨论  46-51
参考文献  51-55
发表论文  55-56
致谢  56-57
附录  57

小鼠TNF-α诱导蛋白TNFAIP1与p50及PCNA相互作用

内容摘要

全文目录

相似论文