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人参二醇、三七皂苷对造血细胞糖皮质激素受体核转录因子的诱导作用

作　者: 陈小红
导　师: 高瑞兰
学　校: 浙江中医学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 糖皮质激素受体 人参二醇 三七皂苷 造血细胞 核转录调控蛋白
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要


目的 借鉴激素作用的细胞内信号传递途径，通过观察人参二醇（PDS）、三七皂苷（PNS）对核转录因子糖皮质激素受体（GR）的诱导作用，探讨PDS、PNS参与造血细胞增殖相关基因转录调控的类激素样效应。 方法 选用人粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-01三个系列的细胞株，分别经PDS或PNS刺激处理后提取核蛋白。用抗人GR（E-20）、GR（P-20）抗体作Western免疫印迹试验，抗原-抗体结合反应出现的特异性条带，用图像扫描作密度分析。用32P标记的具有与GR核转录因子共同结合位点的双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验（EMSA），放射自显影显示GR蛋白与特异性DNA结合复合物的条带。 结果 ①PDS诱导GR（E-20）和GR（P-20）核转录调控蛋白量增加。Western印迹法显示PDS诱导后，K562、CHRF-288和Meg-01三株细胞核内GR（E-20）核转录调控蛋白量分别是未经处理细胞的2.4～5.7倍；GR（P-20）核转录调控蛋白量则是未经处理细胞的1.5～3.3倍。而HL-60细胞内GR（E-20）、GR（P-20）蛋白量在PDS处理前后无明显变化。②PNS诱导GR（E一20）和GR（P一20）核转录调控蛋白量增加。PNS处理后的K562、CHRF一288和Meg一01三株细胞，核内GR （E一20）核转录调控蛋白表达量分别是未经处理细胞的2.4一2.8倍;GR（P一20）的蛋白表达也相似，为1.3一3.9倍。但HL一60细胞对PNS的刺激无明显反应。③PDS诱导GR核转录调控蛋白与DNA促进子结合的活性增高。EMSA结果显示PDS诱导的 K562和CHRF一288二株细胞的GR蛋白一DNA复合物条带密度均明显高于未经处理的细胞。而HL一60本身GR结合活性低，但PDS诱导后GR结合活性增高。④PNS诱导GR核转录调控蛋白与DNA促进子结合的活性增高。K562和CHRF一288二株细胞的GR蛋白一DNA复合物条带密度均明显高于未经处理的细胞。而HL一60本身GR结合活性低，同样经PNS诱导后则显示一定的活性。 结论PDS、PNS促进造血细胞增殖的效应涉及到GR核转录调控蛋白，通过诱导GR蛋白量，及其与DNA促进子结合的活性增高，从而调节造血细胞增殖相关基因的表达，具有与激素相类似的效应。

全文目录


中文摘要  3-5
ABSTRACT  5-7
一、 前言  7-8
二、 材料与方法  8-13
  (一) 药物  8
  (二) 试剂和耗材  8-10
    1 主要试剂  8-10
    2 主要耗材  10
  (三) 仪器设备  10-11
  (四) 实验方法  11-13
    1 人造血细胞株培养和药物诱导处理  11
    2 细胞核蛋白提取  11-12
    3 Western免疫印迹分析  12
    4 电泳带移动阻滞试验(EMSA)  12-13
三、 结果  13-18
  (一) 人参二醇对造血细胞GR核转录调控蛋白的诱导作用  13
    1 诱导GR(E-20)核转录调控蛋白表达增加  13
    2 诱导GR(P-20)核转录调控蛋白表达增加  13
  (二) 三七皂苷对造血细胞GR核转录调控蛋白的诱导作用  13-14
    1 诱导GR(E-20)核转录调控蛋白表达增加  13-14
    2 诱导GR(P-20)核转录调控蛋白表达增加  14
  (三) 人参二醇诱导GR蛋白与DNA促进子结合的活性增高  14
  (四) 三七皂苷诱导GR蛋白与DNA促进子结合的活性增高  14-18
四、 讨论  18-23
五、 结论  23-25
六、 参考文献  25-29
致谢  29-30
附: 文献综述  30-41

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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