学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

蝎毒多肽促进小鼠骨髓造血细胞增殖的作用及机制的研究

作　者: 蒋莉苑
导　师: 董伟华
学　校: 广州医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 蝎毒多肽骨髓造血细胞
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 26次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景和目的造血干细胞(Hemotopoietic stem cell,HSC)移植广泛应用于血液病治疗的临床实践。到目前为止,HSC移植是首先通过注射细胞因子动员骨髓中的HSC释放到血液中去,然后通过血细胞分离机分离获得大量HSC用于移植。细胞因子在促进大量HSC释放入外周血的同时,也可能引发一系列副作用,如免疫应答、肿瘤耐药、降低干细胞归巢能力等;同时,由于细胞因子价格昂贵使得大量等待HSC移植的患者不得不放弃治疗。能否寻找到一种天然物质替代细胞因子,或者与细胞因子联合使用减轻HSC动员的副作用,是血液系统疾病领域研究的热点之一。前期研究提示蝎毒多肽(Scorpion venom peptide,SVP)能够增强带瘤小鼠的免疫力,促进放疗后小鼠外周WBC的增殖。本研究以小鼠骨髓造血细胞(Bone marrow cells,BMC)和研究造血系统功能常用的细胞株M-NFS-60细胞为对象,观察了SVP对骨髓造血细胞促增殖作用,并探讨了SVP发挥作用的可能机制及信号途径。材料和方法1.材料1.1 SPF级BALB/C小鼠,雌雄不限,5-6周龄,体重(20±2)g。1.2细胞株: r-h-MCSF依赖细胞株M-NFS-60(小鼠粒白血病细胞),购自美国ATCC公司(CRL-1838TM)。1.3 SVP:由本课题组分离纯化,包括SVPⅣ、SVPA2、SVPA3、SVPA4、SVPA5、SVPⅡ3(以下简称Ⅳ、A2、A3、A4、A5、Ⅱ3)。2 .方法2.1 SVPⅣ对小鼠骨髓细胞增殖、形态以及受体表达的影响:2.1.1 SVPⅣ对小鼠骨髓细胞增殖的作用观察:采用甲基纤维素半固体集落培养法培养小鼠骨髓集落(colony-forming unit,CFU),实验分为六组:空白对照组、细胞因子(IL-3+M-CSF)组、SVPⅣ低剂量组(SVPIV1μg/ml)、SVPⅣ高剂量组(SVPIV3μg/ml)、SVPⅣ低剂量+细胞因子(IL-3+M-CSF)组、SVPⅣ高剂量+细胞因子(IL-3+M-CSF)组,在培养第7、11、14d观察SVPⅣ以及SVPⅣ与细胞因子联合使用对CFU的影响。2.1.2小鼠集落细胞形态的观察:采用瑞氏-吉姆萨染色观察培养第7d时各组集落细胞形态。2.1.3正常小鼠骨髓第14d集落细胞IL-3R荧光强度:小鼠骨髓细胞培养14d后,免疫荧光法检测各组细胞表面IL-3R的荧光强度。2.2 BALB/C小鼠体内实验观察SVPⅣ对CD34+细胞数以及IL-3R和M-CSFR表达的影响: BALB/C小鼠被随机分为四组:生理盐水对照组、细胞因子(IL-3+M-CSF)组、SVPⅣ组(0.4mg/kg,半数致死量的1/10),SVPⅣ+细胞因子(IL-3+M-CSF)组。各组分别连续1d、3d、5d腹腔注射生理盐水、细胞因子和SVPⅣ,应用流式细胞术检测SVPⅣ对CD34+细胞数以及IL-3R和M-CSFR表达的影响:2.2.1 SVPIV对骨髓造血细胞表面CD34+细胞数的影响2.2.2 SVPIV对骨髓造血细胞表面IL-3R表达的影响2.2.3 SVPIV对骨髓造血细胞表面M-CSFR表达的影响2.3 SVP组分对M-NFS-60细胞STAT5蛋白磷酸化的影响:SVP组分处理M-NFS-60细胞,用Western blotting方法检测JAT-STAT信号转导途径中STAT5蛋白磷酸化的水平。结果1. SVPⅣ对小鼠骨髓细胞增殖的作用观察:甲基纤维素半固体集落培养第7d时,SVPⅣ低剂量组CFU数高于SVPⅣ高剂量组,在第11、14d,SVPⅣ高剂量组CFU数高于细胞因子组和SVPⅣ低剂量组,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各时间点SVPⅣ+细胞因子组CFU数均高于其它组,其中在第7d,SVPⅣ低剂量+细胞因子组达到组间最高值,在第11、14d时,SVPⅣ高剂量+细胞因子组达到组间最高值,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。2. SVPⅣ对小鼠骨髓细胞形态的观察:集落细胞形态观察结果显示,除了空白对照组,其余各组细胞类型均以粒-单核细胞为主。3.正常小鼠骨髓第14天集落细胞IL-3R荧光强度:免疫荧光显示,骨髓集落细胞培养14天后,与空白对照组相比,SVPⅣ低剂量组、SVPⅣ高剂量组、SVPⅣ低剂量+细胞因子组集落细胞增多且IL-3R的荧光强度较对照组增强。4. SVPIV对骨髓造血细胞表面CD34+细胞数的影响:注射1d后,SVPⅣ+细胞因子组CD34+细胞数升至最高,其次是SVPⅣ组,细胞因子组和生理盐水对照组;注射3d后,SVPⅣ+细胞因子组CD34+细胞数有所下降,但仍高于其它各组,SVPⅣ组CD34+细胞数与第1d相比无变化,细胞因子组CD34+细胞数略微升高;注射5d后,SVPⅣ+细胞因子组CD34+细胞数较第3d时略微下降,但仍高于其它各组,然后依次是SVPⅣ组、细胞因子组和对照组。5. SVPIV对骨髓造血细胞表面IL-3R表达的影响:注射1d后,SVPⅣ+细胞因子组和SVPⅣ组IL-3R表达水平未见差异,且高于细胞因子组和生理盐水对照组;注射3d后, SVPⅣ组骨髓细胞IL-3R表达水平升至最高,细胞因子组和SVPⅣ+细胞因子组骨髓细胞IL-3R表达水平相等,较第1d均有所上升;注射5d后,SVPⅣ组骨髓细胞IL-3R表达水平继续升高,高于其它各组,然后依次是SVPⅣ+细胞因子组、细胞因子组、生理盐水对照组。6. SVPIV对骨髓造血细胞表面M-CSFR表达的影响:注射1d后,细胞因子组细胞表面M-CSFR表达水平较其它各组升高,其它各组细胞M-CSFR表达水平未见差异。注射5d后,SVPⅣ+细胞因子组细胞M-CSFR表达高于其它各组,其它各组M-CSFR表达水平相等。7. SVP组分对M-NFS-60细胞STAT5蛋白磷酸化的影响:SVP组分处理M-NFS-60细胞后, STAT5蛋白磷酸化的水平与对照组相比明显升高。综上所述,SVP可促进小鼠骨髓造血集落的生成和CD34+细胞的增殖,并上调骨髓细胞IL-3R和M-NFS-60细胞STAT5蛋白磷酸化的水平,提示SVP促进小鼠造血细胞的增殖可能与细胞因子受体转导途径的激活有关。结论:1.SVPⅣ在体外能够促进小鼠骨髓造血集落的形成,与细胞因子联合应用有协同促增殖作用;SVPⅣ在体内能够促进骨髓细胞CD34+细胞的增殖,并且SVPⅣ还能够促进以粒-单核系为主的造血细胞的生成。2.SVP可在体外和体内上调骨髓细胞IL-3R的表达水平,同时可上调M-NFS-60细胞STAT5蛋白磷酸化的水平,提示SVP促进骨髓造血细胞的增殖作用可能与IL-3R通路有关。

全文目录

缩略词  3-4
中文摘要  4-8
英文摘要  8-12
前言  12-14
材料与方法  14-22
  1 材料  14-17
  2 方法  17-22
结果  22-30
  1 SVPⅣ对骨髓造血细胞集落形成的影响  22-24
  2 集落细胞的形态学观察  24-25
  3 各组小鼠骨髓第14 天集落细胞IL-3R 荧光强度  25
  4 SVPIV 对骨髓造血细胞表面CD34+细胞数的影响  25-26
  5 SVPIV 对骨髓造血细胞表面IL-3R 表达的影响  26-27
  6 SVPIV 对骨髓造血细胞表面M-CSFR 表达的影响  27-28
  7 SVP 对M-NFS-60 细胞STAT5 蛋白磷酸化的影响  28-30
讨论  30-36
结论  36-37
参考文献  37-40
综述  40-49
  参考文献  45-49
致谢  49-50

蝎毒多肽促进小鼠骨髓造血细胞增殖的作用及机制的研究

内容摘要

全文目录

相似论文