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不同剂量甲泼尼龙治疗EAE的疗效及其与GR亚型、SRp30c的相关性

作　者: 危智盛
导　师: 洪铭范
学　校: 广东药学院
专　业: 内科学
关键词: 甲泼尼龙实验性变态反应性脑脊髓炎糖皮质激素糖皮质激素受体α 糖皮质激素受体β SRp30c
分类号: R744.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景：多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统(central nervous systems, CNS)炎性脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病。临床主要表现为复发缓解及进行性加重的神经功能障碍。对于MS急性发作和复发治疗,临床除了部分患者采用β干扰素及免疫抑制剂外,仍主要使用大剂量甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)短程冲击治疗。然而,目前MP使用剂量尚不统一,临床医生常根据经验采用的剂量有500mg/d,1000mg/d,2000mg/d。而且,少数患者对糖皮质激素(glucocorticoid,GC)治疗发生抵抗。GC抵抗机制尚不完全清楚,目前,普遍认为糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的亚型：GRα及GRβ在激素抵抗中起着至关重要的作用。因此,本研究主要是通过MS大鼠模型来分析不同剂量MP冲击治疗后的疗效差异以及疗效与GR亚型之间的关系,并探讨GC抵抗方面的机制。目的：构建MS的动物模型——实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE),通过不同剂量MP冲击治疗EAE大鼠,从大鼠神经功能评分、组织炎性病灶计数、髓鞘脱失评分、细胞因子含量等方面研究其疗效的差异,探讨MP剂量与疗效之间的关系；并对GC治疗后大鼠神经组织中GRα、GRβ及SRp30c表达的变化及其与激素疗效的相关性以及GRβ表达与剪接因子SRp30c的相关性进行分析,探讨GC抵抗的可能机制。方法：1、以新鲜豚鼠脊髓匀浆加完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)为抗原,接种至雌性Wistar大鼠四肢足垫皮下,并在大鼠足背皮下注射百日咳杆菌,构建大鼠EAE模型。2、将EAE大鼠分成大剂量组、小剂量组、模型对照组,分别通过尾静脉注射MP100mg/kg、25mg/kg、等容量生理盐水；另取未造模大鼠作为正常对照组,予等容量生理盐水注射。免疫接种后第12天,大鼠发病达高峰时开始给药。每日对大鼠神经损害表现进行评分,连续给药5天后处死大鼠。3、采血并以放射免疫法检测血浆中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)含量；取大鼠脊髓组织行HE染色及髓鞘染色并对切片进行炎性病灶计数及髓鞘脱失评分；采用免疫组化法检测脊髓组织GRα及GRβ的表达；RT-PCR法对脊髓组织SRp30c mRNA作半定量分析；4、对治疗组大鼠及EAE模型组大鼠的临床评分、组织炎性病灶计数、髓鞘脱失评分、细胞因子含量等进行综合分析,评估大、小剂量MP的疗效差异；并对各大鼠的疗效与其GRα、GRβ及SRp30c表达,GRp与SRp30c的表达进行相关性分析。结果：1、所建立的EAE大鼠临床表现、HE染色、髓鞘染色等方面均符合EAE的临床及病理特征；2、大剂量组及小剂量组EAE大鼠经MP治疗后神经损害表现有明显改善,而模型对照组大鼠症状加重。大剂量组与小剂量组给药前后临床评分改变的差值,无统计学差异；3、大剂量和小剂量组在炎性病灶数、髓鞘脱失评分等方面比较均无统计学差异；4、细胞因子IL-2、TNF-α含量在大、小剂量组间比较无统计学差异；5、GRα及GRβ表达在大、小剂量组间均无显著差异；治疗前后各大鼠临床评分改变的差值与其GRα/GRβ比值呈正相关(r=0.550,P=0.027)；6、SRp30c的表达在大、小剂量组间均无显著差异；治疗前后各大鼠临床评分改变的差值与SRp30c的表达呈负相关(r=-0.583,P=0.018),SRp30c的表达与GRβ呈正相关(r=0.488,P=0.008)。结论：在一定的有效剂量范围内,临床疗效与MP剂量不呈依赖性,增大剂量不能提高疗效；EAE神经组织中GRα/GRβ比值与激素敏感性有着密切的关系,高比值与GC敏感性增高有关,而比值降低则预示发生GC抵抗可能；剪接因子SRp30c可能具有促进GR前体mRNA选择性剪接形成GRβ的作用,并与GC敏感性下降有着密切的关系。

全文目录

中英文缩略语对照  4-5
摘要  5-8
英文摘要  8-11
引言  11-13
第一部分 EAE模型的建立  13-19
  1 材料与方法  13-15
    1.1 材料  13-14
    1.2 方法  14-15
  2 结果  15-17
    2.1 EAE大鼠发病情况  15-16
    2.2 EAE大鼠病理学改变  16-17
  3 讨论  17-19
第二部分不同剂量MP治疗EAE的疗效分析  19-24
  1 材料与方法  19-21
    1.1 材料  19
    1.2 方法  19-21
  2 结果  21-22
    2.1 临床评分比较  21
    2.2 炎性病灶数比较  21-22
    2.3 髓鞘脱失比较  22
    2.4 细胞因子比较  22
  3 讨论  22-24
第三部分 EAE疗效与GR亚型、SRp30c与GRβ表达的相关性分析  24-34
  1 材料与方法  24-29
    1.1 材料  24-25
    1.2 方法  25-29
  2 结果  29-31
    2.1 EAE大鼠治疗前后临床评分改变  29
    2.2 GRa及GRp表达  29-30
    2.3 SRp30c mRNA表达  30-31
  3 讨论  31-34
全文小结  34-35
参考文献  35-39
综述  39-49
硕士研究生期间发表的文章  49-50
致谢  50

不同剂量甲泼尼龙治疗EAE的疗效及其与GR亚型、SRp30c的相关性

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