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产前应激大鼠子代耳蜗核GR、SR-1A改变与听力损伤的实验研究

作　者: 王素芳
导　师: 董雪蕾
学　校: 郑州大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 产前应激 大鼠 耳蜗核 听性脑干反应 糖皮质激素受体 五羟色胺1A受体
分类号: R764
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


随着现代社会竞争的激烈,工作和生活节奏加快,产前应激(prenatal stress,PS)的孕妇在人群中的比例迅速增加,其发生率可达16.5%。产前心理应激不仅对胎儿大脑生长发育产生影响,而且造成子代的远期功能损害,甚至与某些生理解剖缺陷相关联。大量研究表明长期的慢性应激可造成子代神经系统及HPA轴损害,并最终引起中枢神经系统形态结构、代谢及发育障碍,但这些研究均集中于产前应激对子代海马及神经行为损害的研究。随着研究的深入,近年来有国外学者也注意到产前应激对听觉功能有一定的影响,但目前尚缺乏产前应激对听觉中枢的系统实验研究,产前应激对脑干耳蜗核受体的影响及与听力改变的关系研究也未见报道。因此本实验通过建立产前束缚应激大鼠动物模型,采用免疫组织化学技术观察耳蜗核组织糖皮质激素受体(glucocorticoids receptor,GR)和五羟色胺受体亚型1A(serotonin receptor1A,SR-1A)的表达变化,以期探讨产前应激对脑干听觉系统的影响、作用机制以及GR和SR-1A在其中的作用,为孕产期社会心理保健提供理论依据。材料与方法1.SD成年雌性大鼠30只,体重在210～250g之间。成年雄性大鼠5只体重在270～320g之间。以动情期发现精子满视野为妊娠第0天。孕鼠随机分为对照组(control,CON)、中期应激组(moderate stress,MS)和晚期应激组(laterstress,LS)三组,每组10只。对照组不给任何处理;中期应激组和晚期应激组分别于孕第7～13天和第14～20天给予束缚应激。束缚应激每天3次,每次45min。仔鼠按照母鼠应激的时间分为:子代对照组(OC组,母鼠孕期无任何处理);子代中期应激组(OMS组,母鼠应激孕7—13天);子代晚期应激组(OLS组,母鼠应激孕14—20天)。每窝雄性仔鼠各选取2只,体重在4.34—7.12g之间,每组8只。2.各组分别观察仔鼠发育情况中的张耳、开眼时间。3.各组动物(30日龄)分别于处死前测试听性脑干反应(ABR),记录ABR反应阈,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ-Ⅱ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅲ波间期。4.各组动物在ABR测试完毕后行心内灌注,随后开颅取脑干入4%多聚甲醛磷酸缓冲液(PH7.4)固定1周,石蜡包埋,连续切片。每只大鼠选特定平面即耳蜗核进行切片,共取四套切片。一套行HE染色,一套行GR免疫组化染色,一套行SR-1A免疫组化染色,另一套做阴性对照。5.应用德国Leica图像采集系统进行图像采集,Biosens Digital ImagingSystems V1.6软件(上海山富科学仪器有限公司)系统分析各组子代大鼠耳蜗核GR和SR-1A免疫组织化学染色的平均IOD值。6.实验数据经SPSS15.0统计软件进行统计学处理,采用单因素方差分析和相关性分析,所有数据用均数±标准差((?)±s)表示,以P＜0.05为有统计学意义。结果1.三组子代大鼠发育情况比较,OMS组和OLS组张耳,开眼时间均晚于OC组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。2 OMS组和OLS组ABR反应阈升高,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ-Ⅱ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅲ波间期明显延长,与OC组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。3.OMS组和OLS组大鼠耳蜗核神经元细胞发育欠佳,各亚核神经细胞数目明显减少,细胞突起减少,体积小,细胞间隙增大,少数神经元细胞出现核固缩现象。4.光镜下耳蜗核组织GR和SR-1A免疫反应物呈棕黄色,OMS组、OLS组耳蜗核GR和SR-1A免疫组化平均IOD值明显低于OC组,即GR和SR-1A表达明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05)。OLS组耳蜗核GR和SR-1A免疫组化平均IOD值明显低于OMS组,差异有统计学意义(P＜0.05)。5.耳蜗核组织GR、SR-1A的免疫组化IOD值与ABRⅢ波潜伏期呈显著正相关(P＜0.05);耳蜗核组织GR的免疫组化IOD值与ABR阈值呈显著正相关(P＜0.05),耳蜗核组织SR-1A的免疫组化IOD值与ABR阈值无明显相关性(r为0.173,P＞0.05)。结论1产前应激时,子代大鼠有听觉系统功能障碍的表现。2产前应激时,子代大鼠有张耳、开眼时间延长等发育改变。3产前应激时,子代大鼠耳蜗核GR、SR-1A表达减弱且与听觉系统改变呈明显正相关,提示GR和SR-1A表达减弱在产前应激影响子代听觉系统功能过程中发挥重要作用。

全文目录


中文摘要  3-6
英文摘要  6-10
论文部分 产前应激大鼠子代耳蜗核GR、SR-1A改变与听力损伤的实验研究  10-35
  前言  10-11
  材料和方法  11-16
  结果  16-20
  讨论  20-27
  结论  27-28
  附图  28-31
  参考文献  31-35
综述部分 产前应激与神经系统损害  35-53
  参考文献  47-53
中英文缩写词对照  53-54
致谢  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 耳鼻咽喉科学 > 耳科学、耳疾病
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