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1，3-丙二醇产生菌肺炎克氏杆菌的分子育种

作　者: 杨光
导　师: 李季伦
学　校: 中国农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae) 1 3-丙二醇（1 3-PD）甘油发酵突变株
分类号: Q933
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 200次
引　用: 9次
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内容摘要

1，3-丙二醇（1，3-PD）是一种重要的化工原料，具有许多优良特性和很好的应用前景。微生物发酵法生产1，3-丙二醇与化学合成法相比具有显著的优点，因而越来越受到重视，成为当前的研究热点。底物和多产物抑制是造成微生物发酵法1，3-丙二醇产量和甘油转化率低，后期提取困难的主要原因，切断无益副产物的产生途径将提高1，3-丙二醇产量和甘油转化率，并简化后期提取工艺。运用双底物两步法和微氧法对Klebsiella pneumoniae M5al菌株进行补料批式培养，发酵液中1，3-丙二醇浓度分别可达36.09gl^-1和45.22gl^-1，较国内所能达到的水平有很大提高。以Klebsiella pneumoniae M5al为出发菌株，用mini-Tn5随机转座诱变结合自杀性底物筛选的方法得到了两株产乙酸途径pta基因缺失突变株XL-6和XL-11，应用到微氧法发酵中，突变株的乙酸产量为亲株的50％以下，甘油转化率有所提高，但1，3-丙二醇浓度和生产强度有所下降。 PCR扩增出产乙醇途径adhE基因的部分片段和产乳酸途径ldhA基因的部分片段，构建了分别带有部分adhE基因片段和部分ldhA基因片段的自杀质粒pWW和pVV，通过同源重组的手段分别得到了6个adhE^-突变株和4个ldlM^-突变株。6个adhE^-突变株的乙醛脱氢酶活性均降低为亲株的10％以下，乙醇脱氢酶活性降低为亲株的10％左右；4个ldhA^-突变株的乳酸脱氢酶活性均降低为亲株的7％以下。突变株将应用到发酵中以研究其能否提高1，3-丙二醇产量和甘油转化率。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-6
第一章 1，3-丙二醇的研究进展(文献综述)  6-18
  1.1 引言  6-8
  1.2 微生物发酵法生产1，3-丙二醇的研究进展  8-17
  1.3 本课题的研究意义和立题依据  17-18
第二章材料和方法  18-28
  2.1 实验材料  18-20
  2.2 实验方法  20-28
第三章实验结果  28-42
  实验一肺炎克氏杆菌1，3-丙二醇发酵条件的探索  28-30
  实验二 pta~-突变株的选育及在1，3-丙二醇发酵中的应用  30-33
  实验三产乙醇途径中多效基因adhE~-突变株的构建  33-38
  实验四乳酸脱氢酶基因ldhA~-突变株的构建  38-42
实验总结  42-43
参考文献  43-52
附录  52-63
作者简历  63-64
致谢  64

1，3-丙二醇产生菌肺炎克氏杆菌的分子育种

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