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白芥子挥发油抗肿瘤作用初步研究

作　者: 吴圣曦
导　师: 吴国欣
学　校: 福建师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 白芥子挥发油提取工艺小鼠肝癌H22 抗肿瘤细胞凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文阐述了异硫氰酸盐(ITCs)的来源、种类、理化性质、防癌抗癌研究概况以及ITCs的一些其它作用。进行了白芥子挥发油提取工艺的优化,并对其化学成份进行鉴定；观察白芥子挥发油对肝癌H22细胞以及小鼠肝癌H22移植性肿瘤的抑制作用,并初步探究其作用机制,为白芥子挥发油的开发利用提供新的思路。本文以L9(34)正交设计试验优化白芥子挥发油的提取工艺,并通过GC-MS气质联用法分析其化学成份；采用台盼蓝染色排染法以及MTT法检测白芥子挥发油对小鼠肝癌H22细胞的体外抑制作用,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法以及流式细胞仪PI单染法检测白芥子挥发油对H22细胞凋亡与细胞周期的影响；通过建立小鼠肝癌H22腹水瘤模型和实体瘤模型观察白芥子挥发油对小鼠肝癌H22的体内抑制作用,并通过HE染色法观察细胞形态的变化,检测胸腺、脾脏指数探究白芥子挥发油的毒副作用,并采用丫啶橙染色观察肿瘤细胞凋亡的特征,采用免疫组织化学方法检测白芥子挥发油对小鼠肝癌H22实体瘤凋亡基因Bax、Bcl-2表达的影响。结果表明白芥子挥发油最佳提取条件为：水解温度50℃、缓冲液pH值为5.0、抗坏血酸浓度为0.5mmol/L,挥发油提取率可达0.164%,所提取挥发油主要成份为异硫氰酸烯丙酯(89.411%)；白芥子挥发油在体外对小鼠肝癌H22细胞的生长有显著的抑制作用,其抑制作用可能是通过细胞凋亡来实现；白芥子挥发油对小鼠肝癌H22腹水型小鼠具有一定的生命延长作用,且对小鼠肝癌H22实体瘤也有着显著的抑制作用,呈现良好的剂量-效应关系,但大剂量给药组毒副作用明显；白芥子挥发油可能通过上调Bax表达与下调Bcl-2表达,提高Bax/Bcl-2比率以促进肿瘤细胞凋亡。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
中文文摘  5-8
目录  8-11
第一章绪论  11-27
  1.1 白芥子挥发油的化学成分  11
  1.2 ITCs的研究概况  11-24
    1.2.1 ITCs的来源  11-12
    1.2.2 芥子苷酶  12
    1.2.3 ITCs结构  12-13
    1.2.4 ITCs的化学性质  13
    1.2.5 ITCs的测定方法  13
    1.2.6 ITCs化学防癌作用的研究  13-17
    1.2.7 ITCs对肿瘤细胞抑制作用的研究  17-19
    1.2.8 ITCs化学防癌机制  19-20
    1.2.9 ITCs对肿瘤细胞的抑制机制  20-22
    1.2.10 ITCs的基因毒性  22-23
    1.2.11 ITCs的其它作用  23-24
  1.3 课题的研究内容与意义  24-26
  1.4 技术路线  26-27
第二章白芥子挥发油提取工艺优化及其化学成分鉴定  27-33
  2.1 材料与方法  27-28
    2.1.1 材料  27
      2.1.1.1 实验材料  27
      2.1.1.2 药品  27
      2.1.1.3 仪器  27
    2.1.2 方法  27-28
      2.1.2.1 因素水平表的设计  27-28
      2.1.2.2 白芥子挥发油提取  28
      2.1.2.3 白芥子挥发油化学成份的分析  28
  2.2 结果  28-32
    2.2.1 正交实验  28-29
    2.2.2 验证实验  29-30
    2.2.3 化学成份分析  30-32
  2.3 讨论  32-33
第三章白芥子挥发油对小鼠肝癌H22细胞的作用  33-47
  3.1 白芥子挥发油对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用  33-40
    3.1.1 材料  33-34
      3.1.1.1 实验材料  33
      3.1.1.2 药品  33-34
      3.1.1.3 细胞株  34
      3.1.1.4 实验仪器  34
    3.1.2 实验方法  34-35
      3.1.2.1 细胞排染实验  34
      3.1.2.2 MTT法测定白芥子挥发油对H22细胞的抑制作用  34-35
      3.1.2.3 白芥子挥发油对H22细胞生长的抑制  35
      3.1.2.4 数据处理  35
    3.1.3 实验结果  35-39
      3.1.3.1 细胞排染实验  35-37
      3.1.3.2 MTT法测定白芥子挥发油对H22细胞的抑制作用  37-38
      3.1.3.3 白芥子挥发油对H22细胞生长的抑制  38-39
    3.1.4 讨论  39-40
  3.2 白芥子挥发油对小鼠肝癌H22细胞抑制机制初探  40-47
    3.2.1 材料  40-41
      3.2.1.1 实验材料  40
      3.2.1.2 药品  40-41
      3.2.1.3 细胞株  41
      3.2.1.4 实验仪器  41
    3.2.2 实验方法  41-42
      3.2.2.1 琼脂糖凝胶电泳  41-42
      3.2.2.2 PI单染检测细胞周期与细胞凋亡  42
      3.2.2.3 数据处理  42
    3.2.3 实验结果  42-44
      3.2.3.1 DNA琼脂糖凝胶电泳结果  42-43
      3.2.3.2 PI单染结果  43-44
    3.2.4 讨论  44-47
第四章白芥子挥发油对小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用及机制探讨  47-63
  4.1 白芥子挥发油对小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用  47-54
    4.1.1 材料  47
      4.1.1.1 实验材料  47
      4.1.1.2 药品  47
      4.1.1.3 动物与细胞株  47
      4.1.1.4 实验仪器  47
    4.1.2 实验方法  47-48
      4.1.2.1 白芥子挥发油对H22腹水型小鼠生存寿命的影响  47-48
      4.1.2.2 白芥子挥发油对H22小鼠实体瘤生长的影响  48
      4.1.2.3 原位给药法检测白芥子挥发油对肝癌H22小鼠实体瘤生长的影响  48
      4.1.2.4 肿瘤组织细胞形态学观察  48
      4.1.2.5 统计学处理  48
    4.1.3 结果  48-53
      4.1.3.1 白芥子挥发油对H22腹水型小鼠生存寿命的影响  48-50
      4.1.3.2 白芥子挥发油对肝癌H22小鼠实体瘤生长的影响  50-51
      4.1.3.3 原位给药法检测白芥子挥发油对肝癌H22小鼠实体瘤生长的影响  51-52
      4.1.3.4 白芥子挥发油对H22小鼠瘤组织细胞形态学的影响  52-53
    4.1.4 讨论  53-54
  4.2 白芥子挥发油对肝癌H22小鼠细胞凋亡的影响  54-63
    4.2.1 材料  54-55
      4.2.1.1 材料  54-55
      4.2.1.2 药品  55
      4.2.1.3 动物和细胞株  55
      4.2.1.4 主要仪器  55
    4.2.2 方法  55-56
      4.2.2.1 肿瘤细胞形态的吖啶橙(AO)荧光染色观察  55
      4.2.2.2 肿瘤凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的免疫组化分析  55-56
      4.2.2.3 统计学处理  56
    4.2.3 结果  56-61
      4.2.3.1 吖啶橙(AO)荧光染色结果  56-58
      4.2.3.2 小鼠肝癌H22实体瘤凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达结果  58-61
    4.2.4 讨论  61-63
小结与展望  63-67
  一、结论  63-64
  二、本论文的特点  64
  三、展望  64-67
参考文献  67-79
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  79-81
致谢  81-83
个人简历  83-85

白芥子挥发油抗肿瘤作用初步研究

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