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靶向PPARγ基因RNA干扰对激素抑制家兔骨髓基质细胞成骨分化的影响

作　者: 王小刚
导　师: 王义生
学　校: 郑州大学
专　业: 骨外科
关键词: RNA干扰 激素 骨髓基质细胞 核心结合因子a1 PPARγ 成骨分化 兔
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


背景与目的近几十年来随着激素在多种疾病治疗过程中的使用越来越多,随之引发的激素性股骨头坏死（Osteonecrosis of the femoral head,ONFH）也成为骨科常见疾病之一。股骨头坏死导致患者髋部疼痛、髋关节功能障碍,多数病程难以逆转,因此预防激素性ONFH的发生尤为重要。激素性ONFH的确切发病机制仍不清楚,但国内外学者进行了大量研究,提出了很多学说,主要有脂肪代谢紊乱学说、脂肪栓塞学说、骨髓基质细胞成脂分化学说、血管内凝血学说、骨内高压学说、骨质疏松学说等。Cui等研究发现地塞米松可导致股骨头骨髓内脂肪细胞异常增殖肥大,骨细胞内脂质沉积而变性死亡。李月白等研究发现地塞米松能够诱导骨髓基质细胞（Marrow stromal cells,MSCs）内成脂转录因子PPARγmRNA的高表达,而抑制成骨基因Osteocalcin mRNA的表达,这可能与激素性骨坏死的发生机制有关。表明MSCs向脂肪细胞分化过程中,PPARγ基因起着关键性调节作用,是发生激素性骨坏死的一个重要靶基因。本实验从预防角度出发,采用RNA干扰技术,用靶向PPARγ基因的小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）腺病毒载体转染家兔MSCs,同时给予细胞地塞米松,观察其对PPARγmRNA和成骨特异性转录激活因子--核心结合因子a1（Core binding factor alpha 1,Cbfa1）mRNA表达的影响,探讨靶向PPARγ基因RNA干扰保持MSCs成骨分化的作用。方法选用家兔第2代骨髓基质细胞,随机分为7组,对照组（C）:单纯的MSCs,不加特殊处理;模型组（M）:加地塞米松使其终浓度为10-7mol/L(以下地塞米松终浓度均为10-7mol/L);感染空载体组（O）:加空载体腺病毒1×105IU和地塞米松;感染无关序列siRNA组（N）:加无关序列siRNA腺病毒1×105IU和地塞米松;干扰1、2、3组（I1、I2、I3）:分别给予靶向PPARγ的3种siRNA腺病毒1×105IU和地塞米松。培养7天后采用RT-PCR技术检测7组细胞中PPARγmRNA及Cbfa1 mRNA的表达。培养14天后测定各组成骨指标:培养液中骨钙素（osteocalcin,OC）含量,细胞内碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。结果1.与对照组比较,模型组、感染无关序列组及感染空载体组细胞内PPARγmRNA表达明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而3个siRNA腺病毒干扰组细胞内PPARγmRNA的表达降低,均接近于对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.与对照组比较,模型组、感染无关序列组及感染空载体组细胞内Cbfa1mRNA表达、ALP活性、培养液中OC含量均明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而3个siRNA腺病毒干扰组细胞内Cbfa1mRNA的表达、ALP活性、培养液中OC含量均明显增高,均接近于对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。小结1.激素可诱导骨髓基质细胞内PPARγmRNA的高表达,降低细胞内Cbfa1mRNA的表达,降低细胞内ALP活性和培养液中OC含量。2.靶向PPARγ基因的siRNA腺病毒载体转染家兔MSCs后,能够阻断激素作用而下调细胞内PPARγ基因表达,上调其Cbfa1基因表达,使ALP活性和OC含量处于正常水平,保持细胞的正常成骨分化。表明靶向PPARγ基因的siRNA重组腺病毒的干扰作用强大,可阻断激素抑制家兔MSCs成骨分化的作用,为深入研究防治激素性骨坏死提供了可靠的科学依据。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-9
论文部分  9-29
  靶向PPARγ基因RNA干扰对激素抑制家兔骨髓基质细胞成骨分化的影响  9-29
    引言  9-10
    材料与方法  10-14
    结果  14-17
    讨论  17-23
    小结  23-24
    参考文献  24-29
综述部分  29-55
  骨髓间充质干细胞生物特性及其成骨分化研究进展  29-55
    参考文献  43-55
附录部分  55-57
  缩略词  55-56
  硕士期间发表论文  56-57
  致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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