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海洋硫酸盐还原菌抗菌活性菌株筛选及活性物质分离研究

作　者: 韦华生
导　师: 穆军
学　校: 大连交通大学
专　业: 环境科学
关键词: 海洋微生物 硫酸盐还原菌 抗菌活性 菌种鉴定 分离纯化
分类号: X172
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


海洋微生物资源丰富，是抗生素的重要来源。海洋微生物拥有独特的代谢途径，可以产生大量结构新颖、作用独特的代谢产物，被誉为“天然药物的资源宝库”，已成为世界各国开发新型药物的热点领域。 海洋硫酸盐还原细菌属于海洋微生物中一类特殊类群。该类群微生物严格厌氧，能够进行非O2受体的产能代谢。其参与新陈代谢的酶系与海洋好氧微生物有较多的不同，产生的次生代谢产物理论上也会有较大差异，因此具有新抗生素筛选的巨大潜力。 本研究中从大连附近近海海域采集到16份海水样品和9份海泥样品，分离培养出海洋硫酸盐还原细菌125株，进一步纯化得到70株纯菌株；对70株纯菌株进行了抗细菌和抗真菌活性测试，得到10株具有明显活性的硫酸盐还原细菌菌株，占纯菌株的14％。结果显示，海洋硫酸盐还原细菌具有新药开发的巨大潜力。 从黑石礁海域海水中分离到的菌株SRB18对枯草芽孢杆菌具有强烈的抑制作用。通过对菌株SRB18的形态、生理生化、遗传等特征的研究，得出菌株SRB18归属于脱硫弧菌属，且与Desulfovibrio desulfuricans的亲缘关系最近，16SrDNA的同源性高达99.9％。综合各种鉴定指标，将SRB18鉴定为脱硫脱硫弧菌（Desulfovibrio desulfuricans）的一个海洋菌株。 进一步对SRB18活性菌株进行了扩大培养，将30L菌液进行减压浓缩，应用有机溶剂对浓缩液进行液相萃取，得到乙酸乙酯相和正丁醇相粗提物。对粗提物进行薄层层析和液相色谱分离，得到相对较纯的活性化合物。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-7
第一章 绪论  7-23
  1.1 海洋微生物概况  7-9
    1.1.1 抗生素的发现及细菌耐药性  7
    1.1.2 海洋微生物特点及研发优势  7-8
    1.1.3 海洋微生物及其代谢产物的多样性  8-9
  1.2 海洋微生物活性物质研究进展  9-18
    1.2.1 海洋细菌  11-14
    1.2.2 海洋真菌  14-16
    1.2.3 海洋放线菌  16-18
  1.3 海洋厌氧微生物活性物质的研究  18-21
    1.3.1 海洋厌氧微生物概况  18-19
    1.3.2 海洋厌氧微生物活性物质研究  19-21
  1.4 课题的意义及研究的主要内容  21-23
第二章 海洋硫酸盐还原细菌的分离及抗菌活性代谢产物的测试  23-33
  2.1 材料与设备  23-25
    2.1.1 主要药品试剂  23
    2.1.2 设备及仪器  23-24
    2.1.3 实验材料  24
    2.1.4 培养基  24-25
  2.2 实验方法  25-28
    2.2.1 样品的采集与处理  25-26
    2.2.2 海洋硫酸盐还原细菌的富集培养  26
    2.2.3 海洋硫酸盐还原细菌的分离纯化  26-27
    2.2.4 海洋硫酸盐还原细菌抗菌活性筛选  27-28
  2.3 实验结果与分析  28-30
    2.3.1 样品采集  28-29
    2.3.2 硫酸盐还原细菌的分离纯化  29
    2.3.3 活性筛选  29-30
  2.4 讨论  30-32
  本章小结  32-33
第三章 海洋硫酸盐还原细菌SRB18的鉴定  33-45
  3.1 材料与设备  33-34
    3.1.1 主要药品试剂  33
    3.1.2 设备及仪器  33-34
    3.1.3 实验材料  34
    3.1.4 培养基  34
  3.2 实验方法  34-38
    3.2.1 16S rDNA序列分析  35-37
    3.2.2 细胞染色及形态鉴定  37-38
    3.2.3 脱硫绿碇的定性检测  38
    3.2.4 生理生化实验  38
  3.3 实验结果与分析  38-43
    3.3.1 16S rDNA序列分析  38-41
    3.3.2 SRB18形态特征及显微观察  41-43
    3.3.2 生理生化特征  43
  3.4 讨论  43-44
  本章小结  44-45
第四章 SRB18抗菌活性物质的初步分离纯化  45-59
  4.1 材料与设备  45
    4.1.1 实验材料  45
    4.1.2 主要试剂  45
    4.1.3 设备及仪器  45
  4.2 实验方法  45-48
    4.2.1 扩大培养及抗菌活性物质提取  46-47
    4.2.2 抗菌活性初步纯化  47-48
  4.3 实验结果与分析  48-56
    4.3.1 萃取结果  48-49
    4.3.2 薄层层析  49-51
    4.3.3 液相色谱  51-56
  4.4 讨论  56-57
  本章小结  57-59
结论与展望  59-60
参考文献  60-67
攻读学位期间发表的学术论文  67-68
致谢  68

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境微生物学
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