学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

NDRG2蛋白的初步研究

作　者: 张文红
导　师: 刘新平；药立波
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: NDRG2蛋白原核表达抗血清亲和纯化特异性生物信息学 α/β水解酶环氧化物水解酶氧化应激
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
下　载: 68次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

人的ndrg2(N-myc downstream regulated gene 2)基因是本室于1999年从正常成人全脑cDNA文库中最先发现并克隆得到。其染色体定位于14q11.2，含有16个外显子，15个内含子；mRNA全长为2，024nt，编码含有357个氨基酸残基，分子量约40kD的蛋白质。Ndrg基因家族中最早被发现的是Ndrg1，它是在研究N-myc下游调节基因时从小鼠胚胎中发现的一种新基因。目前己报道的该家族成员有4个：ndrg1，ndrg2、ndrg3和ndrg4，它们之间具有较高的同源性，但表达水平在组织发育阶段和分布上差异明显，具体功能还不清楚。 NDRG家族的表达受很多内外界因素的调节，上调NDRG1的有：第四军医大学硕士学位论文 hOIDOCystCin、tillllCmpCin、细胞氧化应激（缺氧、NP＋、各种还原试剂L 视黄酸、P53等；下调的有：nrgen、c－Illyc、ump等。综合己有的文献，推测NDRG家族可能参与细胞生长分化、维持细胞氧化还原电势平衡（氧化应激或生物转化）、阻止肿瘤细胞恶化等。因此，研究其在细胞中的具体功能以及可能的信号通路将具有非常重要的意义。深人研究NDRGZ在体内的组织细胞和亚细胞水平分布特点及其功能，需要高效价和高特异性的NDRGZ抗体。为制备高效价的NDRGZ 抗体，分别构建了 pRset－A雌、pGEX4T＊－d唾仓和 PGEX4Tl 七三种原核重组表达质粒，并在大肠杆菌中诱导表达出相应的融合蛋白；用全长GSTJqDRGZ 蛋白免疫兔，然后用 GST－NDRGZ人和GSTJqDRGZE片段加强免疫，经免疫得到了较高效价的兔抗人NDRZ多克隆抗血清，利用固定于硝酸纤维素膜上的 NDRGZ抗原亲和吸附纯化抗血清，提高了NDRGZ抗体的特异性；并对包涵体形式表达的6His－NDRGZ进行初步的分离纯化。为研究NDRGZ的结构与功能，构建了NDRGZ的酵母融合表达质粒，并在比赤酵母中得到可溶形式的表达；利用金属螫合亲合层析纯化出了6HIS融合的NDRGZ蛋白。由于NDRG家族在基因和氨基酸序列上不与任何已知功能的蛋白质同源。为从结构上得到与功能相关的信息，对助汐基因的调控区和 NDRGZ蛋白的二级结构进行了生物信息学分析。研究发现呷基因的调控区存在多种转录因子结合位点，功能主要涉及组织特异性表达调控，细胞生长发育相关基因的表达调控，刺激反应基因的表达调控等； NDRGZ蛋白在结构上属于 a小水解酶类折叠，折叠分类预测表明 ND RG 2与其中的的细菌环氧化物水解酶的二级结构极为相似，提示 NDRGZ蛋白具有一定酶活性，可能参与细胞抗氧化应激反应，维持细，An）armtBffIofBfochmIlsYn）MdAfblechmrBfobo 4 第四军医大学硕士学位论文胞内氧还电势平衡，参与内外源有毒物质的代谢等。这些信息为以后深入研究其功能提供了重要的线索。

全文目录

英文缩写词表  4-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-14
文献回顾  14-41
  一、 NDRG2家族的研究现状  14-24
  二、毕赤酵母表达系统  24-32
  三、基因和蛋白质的生物信息学分析  32-41
实验内容  41-78
  第一部分兔抗人NDRG2抗血清的制备、纯化及鉴定  41-53
    一、材料和方法  41-48
    二、结果  48-52
    三、讨论  52-53
  第二部分 NDRG2蛋白的酵母可溶表达和纯化  53-65
    一、材料和方法  53-59
    二、结果  59-62
    三、讨论  62-65
  第三部分 ndrg2基因及NDRG2蛋白的生物信息学分析  65-78
    一、材料和方法  65-67
    二、结果  67-75
    三、讨论  75-78
小结  78-79
致谢  79-80
参考文献  80-87

NDRG2蛋白的初步研究

内容摘要

全文目录

相似论文