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人精子特异性乳酸脱氢酶的原核表达、DNA疫苗的构建及其基因免疫效果的初步鉴定

作　者: 辛娜
导　师: 兰风华
学　校: 福建医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 精子特异性乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶C4 基因克隆基因免疫 DNA 疫苗
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

精子特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenaseC4,LDH-C4),特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系。LDH-C4具有很强的免疫原性。动物实验表明,LDH-C4可在多种哺乳动物体内诱导抗LDH-C4抗体产生,后者可导致动物的生育率明显降低,且作用可逆。LDH-C4的精子特异性及其良好的免疫原性使其成为一个很好的避孕疫苗候选对象。本研究利用分子克隆技术,以人睾丸λTripEx cDNA文库为模板,PCR扩增人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-C4)编码序列,并将其插入原核表达载体pET-28a(+),构建原核重组表达载体pET-28a(+)—hLDHC4,在E.coli BL21(DE3 plysS+)中诱导hLDH-C4的His-融合蛋白的表达。通过12%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白免疫印迹、酶活性测定和酶谱分析鉴定表达产物。结果表明,重组hLDH-C4在E.coli中获得较高表达,并具有较高的乳酸脱氢酶活性。用Ni螯和层析柱进行分离纯化,得到了纯度较高的重组蛋白,为特异性抗LDH-C4抗体的检测打下了基础。以原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC4为模板,PCR扩增人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-C4)编码序列,插入真核表达载体pVAX1,构建DNA疫苗pVAX1-hLDHC4。利用兔网织红细胞T7快速偶联的转录/翻译系统检测其表达效果。结果表明,重组载体在该系统中能指导hLDH-C4合成,后者表现出较

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缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
研究内容  10-62
  第一部分精子特异性人乳酸脱氢酶的原核表达  10-40
    一实验材料  11-15
    二实验方法  15-26
    三实验结果  26-36
    四讨论  36-40
  第二部分人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及基因免疫效果的初步鉴定  40-62
    一实验材料  41-44
    二实验方法  44-49
    三实验结果  49-56
    四讨论  56-62
小结  62-63
参考文献  63-69
致谢  69-71
综述  71-78
  参考文献  76-78

人精子特异性乳酸脱氢酶的原核表达、DNA疫苗的构建及其基因免疫效果的初步鉴定

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