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利用SRY基因和微卫星标记鉴定反刍动物性别的研究

作　者: 张秀华
导　师: 吴登俊
学　校: 四川农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: SRY基因性别决定微卫星标记性别鉴定
分类号: S814.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本实验以性别鉴定为研究内容，旨在建立性别鉴定程序，提高性别鉴定的准确率，使性别鉴定技术达到使用化的应用阶段，实现性别控制。实验以反刍动物中的凉山半细毛羊(20个体)、新疆细毛羊(4个体)、山羊(5个体)、牛(6个体)为研究对象，应用多重PCR技术扩增绵羊基因组中X染色体上的微卫星标记MILVET09、AE25和Y染色体上的MCM158、MAF45及SRY基因，根据基因型进行性别鉴定，试图通过一次DNA扩增同时提供性别鉴定和基因分型的信息。实验结果表明：所设计SRY基因的引物具有高度特异性，是性别鉴定的主要依据，而Y染色体上的MCM158、MAF45两标记的引物由于特异性不好，因此不适用于性别鉴定，对于X染色体上所选的两个标记MILVET09和AE25的引物只能进一步验证所鉴定的雄性个体。结论：在所有的被检个体中，能同时扩增出Y染色体上的SRY、MCM158、MAF45，X染色体上MILVET09和AE25，且X染色体上的MILVET09、AE25基因型为纯合子的个体为正常的雄性，如果某些被检个体的MILVET09、AE25两标记基因型出现杂合子的现象，则说明这些被检个体为性染色体发育异常的雄性(XXY)，不能留作种用，本实验所用的雄性实验动物没有出现这种异常情况：被检个体中只有Y染色体上MCM158、MAF45和X染色体上MILVET09、AE25的扩增产物，而没有SRY基因的扩增产物，则被检个体为雌性，且MILVET09、AE25的基因型对雌性个体的性别判断无影响。MCM158、MAF45两标记基因型不影响个体的性别鉴定结果。过去扩增的X-Y特异性片段多为缺乏多态性的片段，不能提供其他个体差异的信息。该实验选择SRY基因以及X染色体和Y染色体的多个多态位点进行复合扩增可以说是一种有意义的尝试，利用该项研究建立的方法既可进行性别鉴定，又可用来同一认定，与传统的性别检查有着本质的区别，这在今后的体育竞赛、金融保险等领域具有广阔的应用前景。另外，该方法还可用于动物肉食制品的监测、性别分化和性发育异常、疾病筛选、法医学、考古学以及各类刑事案件串、并案的侦破等领域。

全文目录

摘要  5-6
一、文献综述  6-15
  1 前言  6
  2 性别决定基因  6-10
    2.1 SRY基因的发现与证实  6-7
      2.1.1 SRY基因的定位历程  6-7
      2.1.2 SRY基因是TDF的证实  7
    2.2 SRY结构  7-8
    2.3 SRY基因的作用与功能  8
    2.4 它性别决定基因  8-10
      2.4.1 抗苗勒氏管激素基因(AMH)  8-9
      2.4.2 类固醇生成因子1(SF  9
      2.4.3 威尔姆氏肿瘤抑制基因(WT  9
      2.4.4 剂量敏感性反转基因(DSS)和X染色体DSS-AHC决定区基因(DAX  9-10
      2.4.5 SOX9基因  10
  3 性别决定的分子模  10-11
    3.1 Z-基因模型  10
    3.2 DSS-基因模型  10
    3.3 Jimenez等的模型  10-11
    3.4 Jennifer的模型  11
  4 性别鉴定的方法及现状  11-15
    4.1 细胞遗传学方法  11
    4.2 生物化学方法  11-12
    4.3 免疫学方法  12-13
      4.3.1 细胞毒性分析法  12
      4.3.2 间接免疫荧光法  12-13
      4.3.3 囊胚形成抑制法  13
    4.4 利用怀孕母畜外周血进行胎儿性别鉴定  13
    4.5 分子生物学方法  13-15
      4.5.1 Y特异性DNA探针  14
      4.5.2 聚合酶链式反应(PCR)进行鉴定  14
      4.5.3 利用徵卫鉴于鉴定性别  14-15
  5 本研究的目的意义  15
二、材料与方法  15-21
  1 、试验材料  15-16
  2 、试验方法  16-21
    2.1 微卫鉴于标记的选择及引物合成  16-18
    2.2 实验的操作流程示意图  18
    2.3 数据处理  18
    2.4 DNA 提取  18-19
    2.5 PCR扩增  19
    2.6 PCR产物的检测  19-20
      2.6.1 琼脂糖凝胶电泳检测  19-20
      2.6.2 ABI310遗传分析停留全自动检测  20
    2.7 电泳信息收集:基因扫描  20-21
    2.8 数据处理:基因分型  21
三、结果分析  21-48
  1 、扩增产物的全自动化分析结果  21-35
  2 、扩增产物全自动化分析比较图  35-46
  3、性别的判断及等位基因的确定  46-48
四、讨论  48-56
  1、SRY基因引物的选择  48-49
    1.1 SRY基因引物的同源性  48-49
    1.2 SRY基因增片段长度的确定  49
  2、微星标记的选择  49-50
  3 、所选微卫星标记的等位基因及其多态性  50
  4 、多重PCR反应及ABI310遗传分析仪自动检测  50-51
    4.1 关于多重PCR反应  50
    4.2 ABI310遗传分析仪自动检测  50-51
  5 、关于性别鉴定中污染的来源泉和防止  51-52
  6 、STR基因扫描技术  52-54
    6.1 STR的原理中  52
    6.2 Genescan数据分析及其分析软件  52-53
    6.3 基因分型中常见问题分析  53-54
    6.4 和分型应注意的问题  54
  7 、别鉴定方法的优化  54-55
  8 、利用所选标记进行性别鉴定的讨论  55-56
五、结论  56-57
六、参考文献  57-63
英文摘要  63-65
致谢  65-66
附表实验所需的主要仪器设备、试剂及消耗材料  66

利用SRY基因和微卫星标记鉴定反刍动物性别的研究

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