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同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头坏死的实验研究

作　者: 邓冰
导　师: 权毅
学　校: 第三军医大学
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充干细胞股骨头坏死 Y染色体性别决定基因同种异体移植
分类号: R681.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:研究同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗兔股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)中供体细胞在宿主体内的存活、分布及转归情况。方法:采用密度梯度离心法行BMSCs分离培养并传代,取第3代细胞行1,1’-双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)荧光标记。通过股骨头内局部注射液氮制作股骨头坏死动物模型。将48只雌性新西兰大白兔随机分成3组,A组16只为单纯造模组,B组造模后注射自体DiI荧光标记BMSCs悬液,C组造模后注射雄兔异体DiI荧光标记BMSCs。术后2、4、6、8周各组分别处死4只动物,行双侧股骨头X线观察,取股骨头标本行HE染色及Masson染色,测定新生骨小梁在股骨头所占的体积百分比。取心脏、肺、肝、脾、肾组织及股骨头标本组织,采用荧光显微镜观察各组织中DiI荧光细胞的表达,采用PCR检测各组织中SRY基因的表达,以实时荧光定量PCR监测供体细胞在体内的数量变化。运用原位杂交技术对股骨头标本内的SRY基因进行检测。结果:1.经DiI荧光染剂标记后细胞形状及生长曲线与未标记细胞基本一致。2.A组动物在术后3 d时,股骨头出现坏死;4 w时出现修复反应,X线可见囊性变;6 w时软骨下骨硬化,出现新月征。3.各时间点B、C组新生骨小梁占股骨头体积百分比均高于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.01),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。4.术后各时间点B、C组心脏、肺、肝、脾、肾组织均未见DiI荧光标记细胞。PCR结果显示,C组各时间点心脏、肺、肝、脾、肾组织中均未检测到SRY基因;C组各时间点股骨头标本上可见SRY基因的表达,且随时间逐渐减少, A、B组未见。5.C组原位杂交显示DAB染色阳性细胞在植入区存活,随时间推移逐渐减少,靠近股骨颈区域的阳性细胞主要集中在坏死骨表面,股骨头软骨下区域阳性细胞主要集中于新骨骨陷凹内。结论:1.液氮局部注射成功制作出兔股骨头坏死模型,并可有效控制股骨头坏死的位置及大小,为相关研究提供可靠的动物模型。2.在无免疫抑制的情况下,同种异体BMSCs和自体BMSCs移植对实验兔股骨头缺血性坏死的治疗效果相似,均成功修复股骨头坏死,两者在病理学上无明显差异。3.移植后同种异体BMSCs可在股骨头局部存活,但数量逐渐减少,但局部并无排异反应,且不在体内再分布。4.移植后的同种异体BMSCs转化成成骨细胞,促进成骨,且膜下成骨与软骨内成骨两种方式并存。

全文目录

英文缩写一览表  5-6
英文摘要  6-8
中文摘要  8-10
正文同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头坏死的实验研究  10-48
  前言  10
  材料与方法  10-18
    一、材料及仪器  10-13
    二、实验动物及其分组  13
    三、方法  13-18
  结果  18-22
    一、BMSCs 形态学观察  18-19
    二、一般情况  19
    三、X 线及大体观察  19-20
    四、荧光显微镜观察  20
    五、组织学观察  20-21
    六、SRY 基因的PCR 检测  21
    七、实时荧光定量PCR  21
    八、定量分析结果  21-22
    九、原位杂交  22
  讨论  22-25
  结论  25-26
  致谢  26-27
  照片  27-45
  参考文献  45-48
文献综述一股骨头坏死造模方式的研究进展  48-53
  参考文献  51-53
文献综述二骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的进展  53-59
  参考文献  57-59
硕士期间撰写和发表的论文  59

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗兔股骨头坏死的实验研究

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