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以小干扰RNA抑制亚铁螯合酶诱导卵巢癌细胞原卟啉Ⅸ积聚的肿瘤荧光检测技术研究

作　者: 姚前尹
导　师: 王晓玉
学　校: 暨南大学
专　业: 妇产科学
关键词: siRNA 亚铁螯合酶氨基酮戊酸原卟啉IX积聚卵巢癌细胞
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测siRNA下调FECH表达对细胞内原卟啉Ⅸ积聚的影响,以及联用小剂量ALA对PpIX产生的荧光强度的改变,探索以siRNA为基础的FECH抑制剂在肿瘤荧光成像诊断和治疗中的意义,为进一步进行体内研究和肿瘤的光敏治疗奠定基础。方法：1.卵巢癌HO8910PM细胞的培养；2.设计并合成靶向FECH的siRNA,用脂质体转染剂Lipofectamine 2000携带后转染HO8910PM细胞；3.用RT-PCR半定量检测细胞中FECH mRNA的表达；4.实验分：①空白对照组(未经任何处理的HO8910PM细胞)、②siRNA组、③0.1mMALA组、④0.1mM ALA+siRNA组、⑤0.5mM ALA组、⑥0.5mM ALA+siRNA组、⑦1mM ALA组、⑧1mM ALA+siRNA组、⑨正常组织上皮细胞0mMALA组空白对照、⑩正常组织上皮细胞1mM ALA+siRNA组,分别运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜在体外检测HO8910PM细胞的荧光强度。结果：1.转染后细胞的FECH mRNA的表达水平低于未转染组,敲减效率为70.1%(vs转染剂组)；2.荧光显微镜成像图显示：随ALA浓度的增高,红色荧光逐渐增强；同一ALA浓度下siRNA干扰后,其红色荧光增强；3.0. 1mMALA联合应用FECH-siRNA为能观察到特异红色荧光的最小浓度；4.②组(135.0307±7.84902)、④组(201.6248±7.36810)、⑥组(361.8257±55.79851)、⑧组(655.9286±72.31014)荧光含量值分别与①组(115.3773±4.53428)、③组(130.6456±11.54809)、⑤组(259.9907±31.33794)、⑦组(388.2075±64.03168)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论：1.化学合成的靶向FECH的siRNA能够下调HO8910PM细胞中FECH基因的表达,从而增加PpIX积聚,并且与小剂量ALA联合应用具有协同效应；2.ALA联合应用FECH-siRNA使肿瘤细胞发出红光的最小浓度是0.1mM。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
目录  8-9
前言  9-12
第一部分 siRNA对HO8910PM细胞亚铁螯合酶mRNA表达的影响  12-24
  1. 材料与方法  12-17
  2. 结果  17-21
  3. 讨论  21-23
  4. 结论  23-24
第二部分 FECH下调联合ALA对HO8910PM细胞原卟啉Ⅸ积聚的实验研究  24-38
  1. 材料与方法  24-27
  2. 结果  27-35
  3. 讨论  35-36
  4. 结论  36-38
创新点总结  38-39
参考文献  39-44
英文缩略词表  44-46
附录  46-47
致谢  47

以小干扰RNA抑制亚铁螯合酶诱导卵巢癌细胞原卟啉Ⅸ积聚的肿瘤荧光检测技术研究

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