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根癌农杆菌介导的β-1，3-葡聚糖酶基因在新疆甜瓜中的转化与表达

作　者: 李群
导　师: 李冠
学　校: 新疆农业大学
专　业: 植物学
关键词: 新疆甜瓜抗病性转基因 β -1 3-葡聚糖酶基因农杆菌介导法
分类号: S652.035.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
下　载: 165次
引　用: 1次
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内容摘要

为了获得抗真菌性病害的新疆甜瓜（Cucumis melo L.）转基因品种，以栽培品种“红蜜脆”、“伽师”、“皇后”、“黄醉仙”为实验材料，通过组织培养，建立了遗传转化的最佳再生体系。在此基础上，选用甜瓜子叶块作为外植体，经含有β-1，3-葡聚糖酶基因的根癌农杆菌（Agrobactriumtumefaciens）LBAG3301浸染，用改良的MS培养基，经卡那霉素抗性筛选，获得了根、茎、叶完整的再生植株。用PCR特异性扩增、琼脂糖电泳、SDS-PAGE、过氧化物酶同工酶电泳等手段，进一步研究了再生植株的基因的整合与表达情况以及同工酶的变化情况。结果表明：与对照相比，只有转化植株DNA样品出现特异性PCR扩增片段，长度约为760bp，与该基因引物扩增产物片段长度吻合，表明该基因确已整合在转化甜瓜基因组内。SDS-PAGE结果表明，转化植株与对照相比在47kD处多一条蛋白质谱带，其分子量与该基因表达产物分子量吻合，可初步确定该基因在转化植株内得到正常表达。过氧化物同工酶电泳表明：转化植株比对照分别在迁移率较快和较慢的区域多出两条酶谱带，表明转化植株与对照相比过氧化物酶同工酶活性有所变化。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
文献综述  9-20
引言  20-22
1．本课题目的与意义  22-23
2．实验材料、设备与实验方法  23-28
  2．1 实验材料  23
  2．2 主要仪器及设备  23
  2．3 实验方法  23-28
    2．3．1 新疆甜瓜再生体系的建立  23-24
    2．3．2 外植体卡那霉素敏感性实验  24-25
    2．3．3 利用农杆菌介导法进行遗传转化  25-26
    2．3．4 转基因植株的分子生物学与生理生化检测  26-28
3．结果与讨论  28-33
  3．1 新疆甜瓜再生体系的建立  28-32
    3．1．1 愈伤与不定芽再生体系的比较  28-29
    3．1．2 品种差异性的影响  29
    3．1．3 不同外植体不定芽诱导情况的差异  29
    3．1．4 种子培养时间对不定芽诱导的影响  29
    3．1．5 激素的用量变化  29-30
    3．1．6 抗生素的用量  30-31
    3．1．7 遗传转化过程中的其他影响因素  31-32
  3．2 分子生物学与生理生化检测  32-33
    3．2．1 PCR扩增  32-33
    3．2．2 蛋白质SDS-PAGE  33
    3．2．3 过氧化物酶同工酶PAGE  33
4 结论  33-35
参考文献  35-41
图片  41-45

根癌农杆菌介导的β-1，3-葡聚糖酶基因在新疆甜瓜中的转化与表达

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