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隐孢子虫CP12/CP21双价核酸疫苗的研究

作　者: 于钦磊
导　师: 张西臣
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 微小隐孢子虫 CP12基因 CP21基因真核表达核酸疫苗
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 84次
引　用: 5次
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内容摘要

隐孢子虫(Cryptosporidium)是一种人畜共患的寄生性原虫,主要寄生于人和其它哺乳动物的胃肠道、禽类的呼吸道等粘膜的上皮细胞内,由它引起的疾病称隐孢子虫病。本研究应用DNA重组技术将微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)保护性抗原基因克隆入真核表达载体,构建单价及双价核酸疫苗,并在双价疫苗基础上插入了CpG-ODN免疫加强序列,将所构建的2个单价和2个双价核酸疫苗免疫动物,诱导产生了特异性免疫应答,并具有一定的保护作用。将重组质粒转染Hela细胞后,经G418加压筛选,得到稳定表达的细胞株。在4种重组质粒转染的细胞中用间接免疫荧光方法检测到特异蛋白,通过Westernblot试验证实所得蛋白具有反应原性。应用真核表达质粒在不同的条件下免疫BALB/c小鼠,对其诱导的免疫应答的动态变化进行检测,结果为4种重组质粒免疫鼠特异性抗体IgG滴度随着免疫次数的增加,呈现逐步升高趋势,4种质粒免疫鼠之间差异不显著(p＞0.05),其中C,D组第三次免疫后IgG滴度与对照组相比差异显著(P＜0.05),H组第三次免疫后IgG滴度与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。试验组C、E、G小鼠的CD4~+T淋巴细胞数和CD4~+/CD8~+T淋巴细胞数的值与对照组相比差异显著(P＜0.05),试验组D、H组小鼠的CD4~+T淋巴细胞数和CD4~+/CD8~+T淋巴细胞数的值与对照组相比差异极显著(P＜0.01)。对攻击感染具有较好的保护作用,试验组与对照组相比排出卵囊明显减少,排卵囊持续时间平均缩短3～4d,其中最佳免疫组减虫率可达到84.1%。将pVAX1-C-CP12-CP21~b经鼻粘膜接种妊娠山羊,并对免疫山羊的后代进行攻虫试验。结果表明核酸疫苗能够诱导母羊产生免疫反应,随着免疫次数的增加抗体滴度逐渐增加,试验组与对照组相比差异极显著(p＜0.01)。接虫感染后,与对照组相比试验组山羊的后代每天排出卵囊数量明显减少,排卵囊持续时间较短(试验组12.5±1.13d,对照组14.4±1.27d)。试验组山羊的减虫率达到65.4%。

全文目录

内容提要  4-8
前言  8-12
第一篇文献综述  12-34
  第一章隐孢子虫病免疫学研究近况  12-20
    1.1 免疫诊断  14-15
    1.2 隐孢子虫引起的宿主免疫反应  15-17
    1.3 免疫防治  17-20
  第二章寄生虫核酸疫苗的研究  20-34
    1.1 核酸疫苗的研究概况  20-21
    1.2 核酸疫苗的免疫机理  21
    1.3 核酸疫苗的特点  21-22
    1.4 核酸疫苗的构建  22-23
    1.5 核酸疫苗免疫效果的主要影响因素  23-30
    1.6 核酸疫苗抗寄生虫感染  30-32
    1.7 核酸疫苗的应用  32-33
    1.8 核酸疫苗的潜在缺陷  33-34
第二篇研究内容  34-88
  第一章隐孢子虫保护性抗原基因的克隆和序列分析  34-52
    1 材料和方法  34-39
    2 结果  39-49
    3 讨论  49-51
    4 小结  51-52
  第二章隐孢子虫核酸疫苗重组质粒的构建与表达  52-70
    1 材料与方法  52-60
    2 结果  60-66
    3 讨论  66-69
    4 小结  69-70
  第三章核酸疫苗接种BALB/c小鼠的免疫保护性研究  70-82
    1 材料与方法  70-73
    2 结果  73-76
    3 讨论  76-80
    4 小结  80-82
  第四章隐孢子虫核酸疫苗对山羊的免疫保护性试验  82-88
    1 材料和方法  82-83
    2 结果  83-85
    3 讨论  85-87
    4 小结  87-88
结论  88-90
参考文献  90-100
致谢  100-102
导师及作者简介  102-104
中文摘要  104-106
Abstract  106-107

隐孢子虫CP12/CP21双价核酸疫苗的研究

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