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DNA疫苗预敏蛋白疫苗增强策略对乙型肝炎病毒表面抗原蛋白免疫应答的影响

作　者: 赵明丽
导　师: 邢益平
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科
关键词: 核酸疫苗 乙型肝炎 表面抗原中蛋白 异质性初免－加强免疫策略
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


背景乙型肝炎病毒感染是一个全球关注的的健康问题，乙型肝炎病毒感染可导致慢性肝炎，肝硬化，甚至肝细胞癌。目前，有效预防乙型肝炎的疫苗是以HBsAg为主要成分的一种重组亚单位疫苗，接种后可以使90%~95%的接种者产生保护性抗体，但仍有5%~10%的人即使接种超过三剂的HBsAg疫苗，也不能产生保护性免疫。慢性HBV携带者，由于其特异性细胞免疫功能低下，机体对HBsAg产生耐受，接种后也不能产生体液和细胞免疫。自核酸疫苗问世以来，其优势逐渐显示出来，被公认在病毒、胞内菌及寄生虫等病原体感染的防治中有更大优势。有研究表明，HBsAg核酸疫苗能刺激机体产生一定强度的特异性免疫应答，具有一定的潜在治疗作用。但目前存在的一个明显问题是动物越大，DNA疫苗的免疫效力越低。增强核酸疫苗免疫的效率的方法有多种，其中异质性初免-加强免疫策略（Heterologous Prime-Boost regimen）是研究较多的免疫策略之一。该策略初次免疫和加强免疫采用不同的免疫原或免疫方法，可诱导免疫系统产生较强的特异性的免疫应答。有研究表明异质性初免-加强免疫策略，在诱导细胞免疫应答方面有比较好的作用，并显示了很好的应用前景。本研究组既往构建了新型核酸疫苗pSW3891/MHBs/adr(简称adr)，该核酸疫苗在小鼠体内诱导了高滴度的抗体，显示出很好的免疫原性。本次实验旨在观察adr核酸疫苗初免蛋白疫苗加强免疫策略对小鼠免疫应答的影响。目的观察核酸疫苗初免，乙型肝炎病毒HBsAg蛋白疫苗增强的免疫策略对Balb/c小鼠免疫应答的影响。方法TransfectionTM脂质体转染法将乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白（MHBs）核酸疫苗pSW3891/MHBs/adr，及空载体pSW3891（简称vector）体外转染293T细胞。免疫印迹法（Western blot）检测adr，vector的体外表达；动物体内研究选用Balb/c小鼠共18只，每组6只，编号后随机分为3组，即空载体质粒组(vector+ vector组)、adr核酸疫苗联合HBsAg蛋白疫苗（adr + protein组）、HBsAg蛋白疫苗联合HBsAg蛋白疫苗(protein + protein组)；于第0周肌肉注射法分别以vector、adr、及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠，于第4周肌内注射法分别以Vector、HBsAg蛋白疫苗、及HBsAg蛋白疫苗免疫小鼠。采用酶联免疫吸附试验(ELISA )检测小鼠血清HBsAg特异性抗体、酶联免疫斑点（ELISPOT）法检测小鼠脾细胞HBsAg多肽特异性IFN-γ分泌细胞。结果adr体外转染293T细胞后，能够表达乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白（MHBs）；体内研究结果显示：除阴性对照vector + vector组外，adr + protein组、protein + protein组小鼠均能检出血清抗-HBs，动态变化显示：小鼠免疫后两周开始产生抗体，第六周抗-HBs达到最高峰，protein + protein组抗-HBs终点滴度(1:72900)与adr + protein组(1:24300)相比明显增高，具有统计学意义(P<0. 05)；应用ELISPOT法检测特异性INF-γ分泌的脾细胞，adr + protein组特异性斑点数为713.94±8.029/10~5细胞(X±SD)，protein + protein组特异性斑点数为379.22±43.06/10~5细胞(X±SD)，vector + vector组特异性斑点数仅为9±3.42/10~5细胞。adr + protein组显著高于protein + protein组（p<0.001），具有统计学意义(p< 0.05)。结论乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗预敏，能明显增Balb/c小鼠对乙型肝炎HBsAg蛋白疫苗细胞免疫应答水平。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-11
  参考文献  10-11
引言  11-12
材料和方法  12-28
结果  28-34
讨论  34-39
小结  39-40
参考文献  40-43
综述  43-58
  参考文献  52-58
附录  58-60
  英文缩略词  58-60
研究生期间发表论文情况目录  60-61
论著  61-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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